外源性bfgf对鸡形觉剥夺性近视眼球后壁组织中vip表达的影响论文

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1、外源性bFGF对鸡形觉剥夺性近视眼球后壁组织中VIP表达的影响论文【摘要】目的:观察外源性bFGF（basicfibroblastgrodeprivationmyopia,FDM）眼球后壁组织血管活性肠肽（vasoactiveintestinalpeptide,VIP）表达的影响。方法:将出生2d龄的40只来亨雏鸡随机分为对照组和实验组，两组右眼为遮盖眼，左眼为自身对照眼。对照组遮盖眼注射1g/L牛血清白蛋白（bovinescrumalbumin,BSA）溶液20μL，共10只鸡；实验组遮盖眼玻璃体腔注射bFGF1，2，4ng+1

2、g/LBSA溶液20μL，每种剂量10只鸡。1deprivationmyopiaofchickAbstractAIM:Toinvestigatetheexogenousbasicfibroblastgrodeprivationmyopia(FDM)ofchickretinal-choroids-sclera.METHODS:Fortytlyintocontrolgroupandexperimentalgroup.Therighteyesofthechickensalbumin(BSA),10chickensaggregated.T

3、hecoveredeyesoftheexperimentalgroupreceivedbFGF(1,2,4ng)+20μL1g/LBSA,munohistochemistrystainingandreversetranscription-polymerasechainreaction(RT-PCR).ThedataentalgroupandbyanalysisofSNK-qamongeachdosageintheexperimentalgroup.RESULTS:VIPlayerofretinalandchoroids;RNAof

4、VIPinautocontroleyesbetRNAofVIPinexperimentalgroupanner(P＜0.05).CONCLUSION:ExogenousbFGFcouldup-regulatetheexpressionofVIPonretinal-choroids-scleraayplayanantagonisticactioninocularenlargementofchickenFDM.·KEYED公司），trizol、逆转录试剂盒、PCR试剂盒（美国Fermentas公司）。1.2方法雏鸡饲养1厚连续切片。免

5、疫组化步骤按ZYMED公司SP法操作，以PBS代替一抗做阴性对照，胞质出现棕黄色颗粒状沉积为VIP阳性表达。另以Trizol常规提取RNA，用DU-70紫外分光光度计测量RNA质量和浓度，A260/280比值为1.8～2.0。以10g/L甲醛变性凝胶电泳三条带显示清晰来证实RNA完整。逆转录获得cDNA。以cDNA为模板，PCR扩增VIP的目的基因。依照美国生物信息中心（NCBI）提供的基因库（GenBank）中查找雏鸡VIP的序列（序列号：NM205366）设计PCR扩增引物，使用Primer5软件设计。VIP引物：sensep

6、rimer5’-tagaaatgcaaggcatgctg-3’,anti-sense5’-tttcgaaagcggctgtagtt-3’，片段长177bp；β-actin引物：senseprimer5’－catctcttgctcgaagtcca－3’，anti-sense5’－atcatgtttgagaccttcaaca－3’，片段长310bp。反应条件为：逆转录，42℃温育60min，94℃变性5min。PCR反应条件为：94℃变性1min，55℃退火45s，72℃延伸45s，共30个循环，最后先于72℃10min，再于4℃保存

7、。反应产物5μL加2.5μL载样缓冲液，在2×TBE电泳缓冲液中以15g/L琼脂糖凝胶电泳，电泳完毕后摄像，用EagleEyeⅡ图像处理系统进行分析，VIPmRNA的相对含量用VIP与β-actin光密度的比值表示。统计学处理：结果均以表示，数据采用SPSS11.5软件进行分析，对照组和实验组比较采用单因素方差分析，不同浓度实验组间采用SNK-q检验，P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1眼球后壁组织VIP的表达对照组和实验组的遮盖眼及自身对照眼的眼球后壁组织均有VIP阳性表达，主要位于视网膜光感受器外节、内核层、内丛状层和脉

8、络膜，可见胞质呈棕褐染色，在神经节细胞层和神经纤维层有较弱表达，胞质呈淡黄着色（图1）。2.2眼球后壁组织VIP的RNA表达雏鸡眼球后壁组织的VIPmRNA经RT-PCR后产生一条177bp的电泳条带，内对照β-actin产生一条310bp电泳条带