白藜芦醇对人宫颈癌c33a，siha和hela细胞增殖与凋亡的影响论文

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1、白藜芦醇对人宫颈癌C33A，SiHa和HeLa细胞增殖与凋亡的影响论文申新于良张靖李胜男潘承恩【摘要】目的：探讨白藜芦醇(Res)对宫颈癌C33A，SiHa和HeLa细胞增殖与凋亡的影响.方法:MTT法检测不同浓度Res对C33A，SiHa和HeLa细胞的抑制率.流式细胞仪检测细胞的凋亡率及细胞周期.荧光显微镜观测凋亡细胞.结果:Res在一定浓度范围内，以浓度和时间依赖的方式抑制宫颈癌C33A，SiHa和HeLa细胞的生长（P0.01）.荧光显微镜下细胞呈现典型的凋亡性改变.Res对细胞周期无明显影响.结论：Res通过诱导细胞凋亡以时间依赖和浓度依赖的方式抑制宫

2、颈癌C33A，SiHa和HeLa细胞的生长.【关键词】白藜芦醇；宫颈肿瘤；细胞凋亡；细胞增殖0引言白藜芦醇（Resveratrol,Res）是广泛存在于葡萄、果类、虎杖等多种食物、药用植物中的一种多酚类化合物.研究表明，Res具有广泛的预防和抗肿瘤作用，它对白血病、乳腺癌、卵巢癌、肝癌、结肠癌、鼻咽癌、喉癌、甲状腺癌等多种癌瘤细胞具有明显的抑制作用［1-6］.但目前对Res抑制宫颈癌的研究还远未深入.宫颈癌(cervicalcancer)是最常见的女性生殖道肿瘤.freelanpapillomavirusHPV）感染密切相关，本实验选择3种宫颈癌细胞株，即宫颈腺

3、癌细胞株HeLa、宫颈鳞癌细胞株SiHa和C33A，其中HeLa和SiHa为HPV阳性的细胞株，C33A为HPV阴性的细胞株.研究Res对人宫颈癌细胞株的增殖与凋亡的影响，旨在探讨Res对宫颈癌潜在的治疗作用.1材料和方法1.1材料人宫颈癌细胞株C33A，SiHa和HeLa由西安交通大学医学院实验医学中心惠赠；Res购自Sigma公司，纯度99%；RPMI1640培养基购自Invitrogen公司；MTT购自Amressco公司；DMSO购自天津巴斯夫化工有限公司；AnnexinV荧光试剂盒购自晶美生物技术有限公司.1.2方法1.2.1细胞培养人宫颈癌C33A

4、，SiHa和HeLa细胞，在含100mL/L胎牛血清，1×105U/L青霉素、链霉素的RPMI1640培养液中，37℃，50mL/LCO2保持饱和湿度培养.1.2.2MTT法检测不同浓度Res对C33A，SiHa和HeLa细胞的生长抑制作用取处于对数生长期的C33A，SiHa和HeLa细胞，调整细胞密度为(6~8)×107/L，接种于96孔板，每孔100μL，细胞贴壁后，实验组加入不同浓度的Res100μL，使其终浓度分别为12.5，25，50，100，200，300，400，600μmol/L；同时设置空白对照组、溶剂对照组和调零孔，每个剂量设3个平行孔.培

5、养板放回孵箱继续培养24，48，72h.取出培养板，每孔加入新鲜配置的MTT20μL（浓度为5g/L），继续培养4h，吸弃上清液，加入DMSO150μL，在平板摇床摇10min（60次/min）后，用酶联仪于490nm处测出个孔吸光度值（A值）.细胞抑制率（%）=（1-实验组A值/对照组A值）×100%.实验重复3次.1.2.3流式细胞仪（FCM）AnnexinV荧光染色检测细胞凋亡以0，200，300μmol/LRes处理细胞48h，分别消化收集各组细胞，调整细胞密度至1×1010/L各取100μL；PBS洗涤2次后，弃上清液；加入500μL结合缓冲液悬浮细胞

6、；加入5μLAnnexinVEGFP混匀后，加入5μLPI，混匀；室温、避光染色15min后，进行荧光显微镜和流式细胞仪的观察和检测，分析细胞凋亡的百分比.实验重复3次.1.2.4流式细胞仪PI染色检测细胞周期消化收集各组细胞，培养24h，再将细胞饥饿24h（即加入不含血清的培养液）后，以0，200，300μmol/LRes处理细胞48h，分别消化收集各组细胞，调整细胞密度至1×1010/L各取100μL；PBS洗涤2次后，弃上清液；加入预冷的700mL/L乙醇固定1h，离心，PBS洗涤2次，加入RNAase，37℃水浴30min后加PI染色15min，离心后

7、流式细胞仪检测细胞周期.实验重复3次.1.2.5荧光显微镜观察将300μmol/LRes处理细胞48h后染色：加入5μLAnnexinVEGFP，10μLPI混匀，室温、避光反应15min.进行激光共聚焦显微镜下凋亡细胞形态检测与观察.统计学处理：所有数据用x±s表示，采用方差分析进行组间比较分析.P0.01为差异有统计学意义.2结果2.1Res对人宫颈癌C33A，SiHa和HeLa细胞的生长抑制作用Res在50μmol/L以下对宫颈癌细胞的生长无统计学影响，Res在100~600μmol/L浓度范围内，以浓度和时间依赖的方式抑制宫颈癌C33A细胞的生长（P0

8、.01）.Res在200