苦参碱对小鼠免疫功能的影响

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1、苦参碱对小鼠免疫功能的影响作者：尚智，丁涛，温富春，张伟，张殿文，纪凤兰，徐惠波【摘要】目的:观察苦参碱对小鼠脾淋巴细胞增殖和释放白细胞介素-2（IL-2）及腹腔巨噬细胞释放白细胞介素-1（IL-1）的影响。方法:溴化四唑蓝比色法测定脾淋巴细胞增殖，胸腺细胞增殖法和溴化四唑蓝比色法测定IL-1、IL-2活性。结果:苦参碱可明显抑制ConA和LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖及ConA诱导的小鼠脾细胞释放IL-2，对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞释放IL-1亦有一定的抑制作用。结论:苦参碱可抑制体外培养小鼠脾淋巴细胞增殖

2、和释放IL-2及腹腔巨噬细胞释放IL-1。【关键词】苦参碱;免疫功能:淋巴细胞增殖;IL-1;IL-2　　苦参碱Matrin是豆科槐属植物苦参Sophorafla-vescensAit.，苦豆子S.AlopecuroidesL，广豆根S.Sub-prostrataChunetT.Chen等中草药的活性成分。大量　　2.2.2IL-2活性的测定　　常规法制备小鼠胸腺细胞悬液，加入96孔培养板，每孔50ul，使细胞终浓度为1×105.ml，再加入终浓度为3μg.ml的ConA50ul及不同稀释度的待测样品100μl，

3、以培养液作为阴性对照，置于37℃5%CO2培养箱中培养24h后，每孔加入5mg.mlMTT10μl，继续培养4h，取出96孔板，1000r.min离心5min，弃上清，每孔加入DMSO150μl，置于微量振荡器上振荡10min，酶标仪570nm处测光吸收值A。吸光度大小反映IL-2活性的强弱［3］。　　2.3苦参碱体外对正常小鼠腹腔巨噬细胞释放IL-1的影响　　2.3.1IL-1的粗提　　常规方法制备24孔板巨噬细胞单层，每孔加入终浓度为10ug.ml的LPS0.5ml，以激活巨噬细胞，同时每孔加入不同浓度的试药

4、1ml，培养48h后收获上清，得诱生的IL-1粗品，-20℃保存待测［3］。　　2.3.2IL-1活性的测定　　常规法制备107/ml小鼠胸腺细胞悬液，加入96孔板，每孔0.1ml，同时加入不同稀释度的IL-1待测上清液0.1ml，终浓度为2μg.ml的ConA0.1ml，每个浓度5个复孔，以培养液作为阴性对照，置37℃5%CO2培养箱中培养68h后，每孔加5mg.mlMTT10μl，继续培养4h，1000r.min离心5min，弃上清，每孔加入DMSO150μl，微量振荡器振荡10min，酶标仪570nm处测吸

5、光度A值。吸光度大小反映IL-1活性的强弱［4、5］。　　2.4统计分析　　采用SPSS10.0统计软件进行F检验和q检验。统计结果用（ˉx±s）表示。　　3结果　　3.1对小鼠T、B淋巴细胞增殖的影响　　见表1、表2。表1体外对ConA非特异性刺激小鼠T淋巴细胞增殖的影响（略）注:与阴性对照组相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。表2体外对LPS非特异性刺激小鼠B淋巴细胞增殖的影响（略）注:与阴性对照组相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<

6、0.001　　从表1可见苦参碱在0.5mg.ml、0.25mg.ml和0.05mg.ml3个浓度可明显抑制T淋巴细胞增殖，且呈剂量依赖关系。从表2可见苦参碱在4个浓度均可明显抑制T淋巴细胞增殖，且呈剂量依赖关系。　　3.2体外对正常小鼠脾细胞释放IL-2的影响　　见表3。表3体外对正常小鼠脾细胞释放IL-2的影响（略）注:与阴性对照组相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001从表3可见苦参碱在0.5mg.ml，0.25mg.ml和0.05mg.ml3个浓度可明显抑制脾细胞释放I

7、L-2，且呈剂量依赖关系。　　3.3体外对正常小鼠腹腔巨噬细胞释放IL-1的影响　　见表4。表4体外对正常小鼠腹腔巨噬细胞细胞释放IL-1的影响（略）注:与阴性对照组相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。　　从表4可见苦参碱在0.25mg.ml浓度可明显抑制脾细胞释放IL-2，在其它浓度亦呈抑制趋势，但未见明显差异。　　4讨论　　近年来，苦参碱作为免疫抑制药物在临床中应用较多，多用于治疗病毒性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤等疾病。但对苦参碱免疫抑制作用的体外实验报道较少。淋巴

8、细胞是机体的重要免疫细胞，淋巴细胞转化实验是检测淋巴细胞增殖活性的一种有效的方法，常用于评价药物对机体免疫功能的影响。腹腔巨噬细胞是机体免疫系统的另一重要免疫细胞，是主要的抗原提呈细胞，且具有很强的吞噬功能，在特异性免疫应答的诱导和调节中起关键作用，巨噬细胞可分泌IL-1、IL-6等多种生物活性物质，这些活性物质在机体的免疫调节中起着重要的作用。本研究结果证实苦参碱可抑制