hplc法同时测定风寒感冒片中葛根素和橙皮苷的含量

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1、HPLC法同时测定风寒感冒片中葛根素和橙皮苷的含量【摘要】目的建立风寒感冒片的含量测定方法。方法采用HPLC法，色谱柱为DiamondC18（4.6mm×250mm，5μm），流动相为甲醇水（体积比25∶75），检测波长：葛根素250nm，橙皮苷283nm。结果葛根素在进样量为0.156～3.152μg范围内，橙皮苷在进样量为0.100～2.006μg范围内，与峰面积呈良好的线性关系；平均加样回收率：葛根素为99.0%，RSD=0.97%，橙皮苷为98.4％，RSD=1.27％（n=9）。结论该法操作简便易行、准确可靠

2、，可用于风寒感冒片的质量控制。【关键词】风寒感冒片葛根素橙皮苷高效液相色谱法风寒感冒片是由麻黄、葛根、紫苏叶、防风、陈皮、白芷等十一味中药经提取加工而成的片剂，具有解表发汗、疏风散寒的作用，临床用于感冒身热、头痛、咳嗽、鼻塞、流涕。本文采用HPLC法同时测定本品所含葛根素、橙皮苷的含量，以此作为风寒感冒片的质量控制指标。　　1仪器、试剂与样品　　illiPORE纯水器（美国密里博公司）。葛根素对照品、橙皮苷对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用）；甲醇为色谱纯；水为高纯水；其他试剂均为分析纯；风寒感冒片样品（规格

3、：每片重0.6g）及缺葛根、陈皮的阴性对照样品由广西辉越制药有限公司提供。　　2方法与结果　　2.1色谱条件DiamondC18色谱柱(5μm，4.6mm×250mm)；流动相为甲醇水（体积比25∶75）；检测波长葛根素为250nm，橙皮苷为283nm；柱温：35℃；进样量：10μL。理论板数按葛根素峰计算应不低于2000。色谱图见图1。　　2.2供试品溶液的制备取本品10片，除去包衣，研细，取0.4g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入体积分数30％乙醇100mL，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用体积分数30

4、％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。　　1.葛根素；2.橙皮苷　　图1对照品（A）、供试品（B）和阴性对照品的色谱图（略）　　Figure1HPLCchromatogramsofstandard（A）,sample（B）andblanksample（C）　　2.3线性关系考察精密称取葛根素对照品19.70mg、橙皮苷对照品12.54mg，置25mL量瓶中，加体积分数30％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品贮备液。精密吸取上述对照品贮备液0.5、1、2、3、5、10mL，分别置25mL量瓶中，加体积

5、分数30％乙醇稀释至刻度，摇匀，进样10μL测定。以对照品进样量为纵坐标，峰面积为横坐标绘制标准曲线，结果葛根素进样量在0.158～3.152μg范围内呈良好的线性关系，其回归方程为:Y=2.159×105X+1.164×105（r=0.9998）；橙皮苷进样量在0.100～2.006μg范围内呈良好的线性关系，其回归方程为:Y=1.153×105X+1.435×105（r=0.9999）。　　2.4精密度试验取供试品溶液（批号050701），连续进样5次，测定色谱峰面积，结果葛根素RSD为0.5％，橙皮苷RSD为0.7

6、％，表明仪器精密度良好。　　2.5稳定性试验对同一供试品溶液（批号050701），12h内每隔2h测定1次，结果葛根素的RSD为0.8%，橙皮苷的RSD为0.9％，表明供试品溶液在12h内稳定性良好。　　2.6重复性试验取供试品（批号050701）6份，按“2.2”项下方法制成供试品溶液，进样测定。结果6份样品中葛根素平均含量为5.34mg/片，RSD为0.8％；橙皮苷平均含量为0.32mg/片，RSD为1.0％。表明重复性良好。　　2.7加样回收率试验取本品（批号050701，葛根素含量5.34mg/片、橙皮苷含量0.

7、32mg/片）0.2g，共9份，精密称定，分别精密加入对照品溶液（精密称取橙皮苷对照品10.12mg，置10mL量瓶中，加体积分数30％乙醇使溶解并稀释至刻度，即得含橙皮苷1.012mg·mL-1的对照品溶液，备用；另精密称取葛根素对照品33.68mg，置500mL量瓶中，精密加入上述橙皮苷对照品溶液2mL，加体积分数30％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得含葛根素0.06736mg·mL-1、橙皮苷0.004048mg·mL-1的溶液）20、25、30mL，按“2.2”项下方法制备并测定含量，计算回收率，结果见表1、表2。　　

8、2.8样品测定取3批样品按照“2.2”项下方法制成供试品溶液，进样测定，用峰面积按外标法计算含量，结果见表3。　　3讨论　　3.1取本品供试液适当稀释后，于紫外分光光度计上在200～400nm范围内扫描，其最大吸收波长为250.4nm与283.6nm，与2种对照品的最大吸收波长基本一致，故采用250nm作为葛根素测定