氧氟沙星葡萄糖注射液细菌内毒素检查法的建立

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1、氧氟沙星葡萄糖注射液细菌内毒素检查法的建立王贵英（贵州省食品药品检验所贵州贵阳550004）【摘要】目的建立氧氟沙星葡萄糖注射液的细菌内毒素检查法。方法按中国药典2010年版二部附录XIE细菌内毒素检查法。结果木品稀释为含氧氟沙星0.33mg?mL-l的溶液对细菌内毒素检查无干扰作用，按拟定标准检验，该品种3批样品细菌内毒素检查结果均符合规定。结论对氧氟沙星葡萄糖注射液的检测可用细菌内毒素检查法代替家兔热原检查法，其细菌内毒素的限值（L）为0.75EU?mg-lo【关键词】氧氟沙星葡萄糖注射液细菌内毒素检查凝胶法干扰试

2、验氧氟沙星葡萄糖注射液为较常用的嗤诺酮类抗生素。主要用于由敏感菌引起的泌尿生殖系统感染、呼吸道感染、胃肠道感染、伤寒、骨和关节感染、皮肤软组织感染、败血症。氧氟沙星葡萄糖注射液收载于国家药品标准WS1—（X-070）-2002Z,原标准规定用家兔法进行热原检查，受企业委托，建立其细菌内毒素检查法，代替家兔热原检查法。1实验材料及仪器1.1鲎试剂（TAL）湛江博康海洋生物有限公司，规格：O.lmL,批号：1210150，灵敏度:0.25EU?mL–l;湛江安度斯生物有限公司，规格:O.lmL,批号：11111

3、42,灵敏度：0.25EU?mL–l。1.2细菌内毒素工作标准rRi（WSE）中国食况药见检定研究院，效价:160EU/支，批号：150601—201174。1.3细菌内毒素检查用水（BET）中国盘品药rfij检定研究院，规格:5mL,批号:201208。1.4氧氟沙星葡萄糖注射液：贵州科伦药业有限公司，规格lOOmL:氧氟沙星0.2g与葡萄糖5g,批号：A121003C、A121003E、A121003F。1.5仪器202-2AB型电热恒温干燥箱、洁净工作台，ET-96内毒素凝胶法测定仪、ZH-2旋涡混合

4、器、微量移液器、无热原吸头、试管、试管架、75%洒精棉球、封U膜、剪刀、砂轮。所用玻璃器皿均以250°C干烤1小吋以上。2方法与结果2.1细菌内毒素限值(L)的确定［1】按照中国药典2010年版二部附录XIE细菌内毒素检查法和药品说明书，根据公式：L=K?M-1,苏中M为0.4g,K=5EU?kg-l?h-l,中国人均体重按60kg计算，则限值L=0.75EU?mg-l。2.2鲎试剂灵敏度复核按中国药典2010年版二部附录XIE细菌内毒素检查法进行［1】，检查结果显示，2批鲎试剂经细菌内毒素工作标准品检查&lambda

5、;C与λ—致，符合规定。2.3干扰试验预试验2.3.1氧氟沙星葡萄糖注射液奋效稀释浓度的计算计算公式为MVC=λ?L-l,其中L为氧氟沙星葡萄糖注射液的细菌内毒素限值0.75EU?mg-l,λ为當试剂标示灵敏度，0前市售當试剂灵敏度λ通常在0.5〜0.03EU?mL-l,则氧氟沙星葡萄糖注射液的对应奋效稀释浓度为0.67,0.33,0.17,0.08，0.04mg?mL-lo2.3.2实验操作将氧氟沙星葡萄糖注射液用BET水稀释为含氧氟沙星浓度为原液，0.67,0

6、.33,0.17,0.08,0.04mg?mL-1的溶液，将此系列浓度溶液记为NPC。另制备同样系列浓度的供试液，使每一浓度的供试液中均含冇2λ(0.5EU?mL-l)浓度的细菌内毒素，记此系列溶液为PPC。取两个厂家的鲎试剂，分别与上述NPC和PPC进行反应，每一浓度重复2管，并设阳性对照记为PC和阴性对照记为NC,混匀后封口，置内毒素凝胶法测定仪60min。干扰试验预试验结果表明：用灵敏度为0.25EU?mL-l的鲎试剂对氧氟沙星葡萄糖注射液的细菌内毒素试验，结果均在0.33mg?mL-l及以下浓度时

7、无抑制干扰。2.4正式干扰试验为了最终确认是否存在抑制因素的影响，进行正式干扰试验。取3批氧氟沙星葡萄糖注射液样品用BET水稀释至0.33mg?mL-l,用该溶液和BET水分别将WSE稀释成含内毒素0.5(2λ)、0.25(λ)、0.125(0.5λ)>0.0625(0.25λ)EU?mL–l的溶液，分别与2个厂家灵敏度为0.25EU?mL–l的鲎试剂反应，每一浓度重复4管，并设阴性对照，按中国药典2010年版附录细菌内毒素检查法干扰试验项

8、进行实验。结果Es在0.5λ〜2λ（包括0.5λ和2λ）及Et在0.5Es〜2Es（包括0.5ES和2Es）之间，符合药典规定，供试品在该浓度下无干扰作用。表1干扰试验结果2.5供试品细菌内毒素检查按中国药典2010年版细菌内毒素检查法[1】，取3批氧氟沙星葡萄糖注射液用BE