康腹止泻片微生物限度检查法验证

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1、康腹止泻片微生物限度检查法验证作者：朱文娟，林铁豪，钟燕飞，林丽英【摘要】目的建立康腹止泻片微生物限度检查法。方法采用培养基稀释法。结果该法能有效消除康腹止泻片在检验条件下对细菌、真菌及酵母菌的抑制作用;控制菌可用常规法检查。结论该法简单、快捷，可用于康腹止泻片的微生物限度检查，有效控制其质量。【关键词】康腹止泻片;微生物限度检查;培养基稀释法　Abstract:ObjectiveToestablishamethodformicrobiallimittestofKangfuzhixiepills.MethodsCulturemediumdilutedmethoded

2、iumdilutedmethodcaneliminatethepills′inhibitingeffectonbacteria,fungi,yeastandexaminedesignatedmicrobialspecies.ConclusionThismethodissimple,accurate,feasibleandsuitableformicrobiallimittestandqualitycontrolofKangfuzhixiepills.　　Keyicrobiallimittest;culturemediumdilutedmethod　　康腹止泻片是由木

3、馏油、老鹳草粉、黄柏干浸膏等药材经加工而成的中成药片剂。本品味特异，具有化滞止泻功效。用于饮食不节或水土不服导致的食欲不振、恶心呕吐、腹胀腹泻、消化不良等症。处方中的老鹳草、黄柏具有一定的抑菌作用[1，2]，若用常规法对其进行微生物限度检查，结果将不能真实反映样品的污染情况[3]。为此，根据《中国药典》2010年版的有关规定[4]，对康腹止泻片微生物限度检查方法进行验证，以确定其是否适用于本品的微生物限度检查，从而准确有效地检出样品中污染的微生物[5]。验证表明，采用培养基稀释法对本品进行检查，可使污染的微生物能被顺利检出，常规法则可用于控制菌的检查。该方法简便、快

4、捷、准确、可行，能有效控制康腹止泻片的质量，并可为同类药品的微生物限度检查法提供科学的实验依据。　　1仪器与试药　　1.1菌种　　金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、大肠埃希菌[CMCC(B)44102]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]、白色念珠菌[CMCC(F)10123]，均购自中国药品生物制品检定所;黑曲霉(ATCC16404)购自广东省微生物研究所。　　1.2培养基　　营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、改良马丁培养基、改良马丁琼脂培养基、胆盐乳糖培养基。　　1.3供试品　　康腹止泻片(批号41EA1)，大幸药品株式会社。　

5、　2方法与结果　　2.1菌液的制备[4]　　2.1.1大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌　　取新鲜培养物接种至营养肉汤培养基中，培养18～24h;培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1mL含菌数为50～100cfu的菌悬液。用于控制菌验证时制成每1mL含菌数为<100cfu的菌悬液。　　2.1.2白色念珠菌取新鲜培养物接种至改良马丁培养基中，培养24～48h;培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1mL含菌数为50～l00cfu的菌悬液。　　2.1.3黑曲霉取新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养5～7d，加入0.9%无菌氯化钠溶液3～5mL，将孢

6、子洗脱。然后，用适宜的方法吸出胞子悬液至无菌试管内，用0.05%(体积分数)聚山梨醇的0.9%(体积分数)无菌氯化钠溶液制成每lmL含孢子数50～100cfu的孢子悬液。　　2.2供试液的制备　　取样品10g，加入pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液至100mL，用匀浆仪打碎，摇匀，制成1∶10的供试液。　　2.3验证试验　　验证实验所用培养基均按《中国药典》2010年版附录“微生物限度检查法”要求，进行培养基适用性检查，且均符合规定。　　2.3.1细菌、真菌及酵母菌计数(平皿法培养基稀释法)在确定适合的检查方法后，验证试验至少应进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验

7、菌每次试验的回收率。　　试验组:各取1∶10供试液1、0.5、0.2mL和试验菌液1mL，分别注入平皿中，立即倾注相应琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。　　菌液组:取试验菌液1mL注入平皿中，立即倾注相应琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，测定所加的试验菌数。　　供试品对照组:各取1∶10供试液1、0.5、0.2mL，按试验组操作，不加菌液，测定样品本底菌。　　计算各试验菌株的回收率，结果见表1。表1计数验证菌各菌株回收率结果　　由表1可见:黑曲霉的回收试验，当供试液为1mL·皿-1时，3次试验的回收率均即可达到70%以上;白色念珠