罗红霉素片微生物限度检查法的验证论文

《罗红霉素片微生物限度检查法的验证论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、罗红霉素片微生物限度检查法的验证论文.freelicrobiallimittestmethodforRoxithromycinTablets.Methods:FiltrationandverificationmethodofChinesePharmacopoeia2005orethan70%andthequalityofcontrolgermcheckbrane-filtercanbeusedinmicrobiallimittestforRoxithromycinTablets.KeyycinTablets;Microbiallimittest;Membrane-filter

2、罗红霉素有杀菌作用,对微生物生长有干扰,按常规方法测定其微生物限度无法确保结果的准确性,方法学验证是保证结果准确的唯一途径。1仪器与材料1.1仪器开放式薄膜过滤器(孔径0.45μrn,滤膜直径50mm),恒温培养箱、培养皿,抽滤泵。1.2样品罗红霉素片(丽珠制药厂,批号:070301、070501;沈阳管城制药有限公司,批号:20061101)。1.3培养基营养琼脂培养基,玫瑰红钠琼脂培养基,胆盐乳糖增菌液,.freell,制成1∶10供试液。2.1.2菌液制备大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌及黑曲霉菌液均按《中国药典》2005年版二部方法制备,浓度为50

3、~100cfu/ml1。2.1.3细菌总数、霉菌及酵母菌总数检查方法的验证2.1.3.1试验组取供试液1ml,加入装有50ml稀释液的滤器中,经薄膜过滤后,冲洗3次,每次100ml,然后加入含有1ml菌液的冲洗液100ml,抽滤,取膜,将滤膜正贴于培养基平板,平行制备2个平皿。按《中国药典》2005年版菌落计数方法计数。2.1.3.2菌液组测定所加的试验菌数。除不加供试液外,操作同试验组。2.1.3.3供试品对照组测定供试品本底菌数。除不加菌液外,操作同试验组。2.1.3.4稀释液对照组测定稀释液是否干扰微生物生长。取稀释液lml,其余同试验组。2.1.4控制菌检查方法的验证

4、2.1.4.1试验组取供试液的上清液10ml,置于有100ml稀释液的薄膜过滤器内,过滤、冲洗3次,每次100ml,最后1次加入10~100cfu/ml大肠埃希菌菌液1ml,抽滤,取出滤膜加入到100ml胆盐乳糖增菌液中,37℃恒温培养l8~24h后作MUG试验及靛基质试验。2.1.4.2阴性菌对照组方法同试验组,加入10~100cfu/ml金黄色葡萄球菌菌液lml代替大肠埃希菌。同时作稀释液和培养基阴性对照。2.2结果2.2.1细菌总数、霉菌及酵母菌总数检查方法验证5种菌株的回收率均高于70%(表1),符合验证规定。稀释剂对照组的回收率(%)=(稀释剂对照组平均菌落数/菌液

5、组平均菌落数)×100%;试验组的回收率(%)=(试验组平均菌落数-供试品对照组平均菌落数)/菌液组平均菌落数×100%。2.2.2控制菌检查方法验证试验组阳性菌对照检出大肠埃希菌,阴性菌对照未检出大肠埃希菌(表2),说明本法可检出大肠埃希菌,具有专属性,符合验证规定。3讨论薄膜过滤使微生物充分被滤膜截留,再用适量无干扰的冲洗液洗去供试样品的干扰,就能准确地进行样品的微生物限度检查。冲洗液的用量是关键,如过量冲洗,会使菌体受损、不利于生长,从而影响回收率,还会使滤膜受损、孔径改变,影响实验结果。反之,如冲洗不充分,样品抗菌作用就不能彻底消除,也无法保证实验结果的准确性。