康腹止泻片微生物限度检查法验证论文

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1、康腹止泻片微生物限度检查法验证论文.freelethodformicrobiallimittestofKangfuzhixiepills.MethodsCulturemediumdilutedmethodediumdilutedmethodcaneliminatethepills′inhibitingeffectonbacteria,fungi,yeastandexaminedesignatedmicrobialspecies.ConclusionThismethodissimple,accurate,feasibleandsuitableformicrobiall

2、imittestandqualitycontrolofKangfuzhixiepills.Keyicrobiallimittest;culturemediumdilutedmethod康腹止泻片是由木馏油、老鹳草粉、黄柏干浸膏等药材经加工而成的中成药片剂。本品味特异，具有化滞止泻功效。用于饮食不节或水土不服导致的食欲不振、恶心呕吐、腹胀腹泻、消化不良等症。处方中的老鹳草、黄柏具有一定的抑菌作用1，2.freelL含菌数为50～100cfu的菌悬液。用于控制菌验证时制成每1mL含菌数为100cfu的菌悬液。2.1.2白色念珠菌取新鲜培养物接种至改良马丁培养基中，培养2

3、4～48h;培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1mL含菌数为50～l00cfu的菌悬液。2.1.3黑曲霉取新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养5～7d，加入0.9%无菌氯化钠溶液3～5mL，将孢子洗脱。然后，用适宜的方法吸出胞子悬液至无菌试管内，用0.05%(体积分数)聚山梨醇的0.9%(体积分数)无菌氯化钠溶液制成每lmL含孢子数50～100cfu的孢子悬液。2.2供试液的制备取样品10g，加入pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液至100mL，用匀浆仪打碎，摇匀，制成1∶10的供试液。2.3验证试验验证实验所用培养基均按《中国药典》2010年版附录“微生物限

4、度检查法”要求，进行培养基适用性检查，且均符合规定。2.3.1细菌、真菌及酵母菌计数(平皿法培养基稀释法)在确定适合的检查方法后，验证试验至少应进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。试验组:各取1∶10供试液1、0.5、0.2mL和试验菌液1mL，分别注入平皿中，立即倾注相应琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。菌液组:取试验菌液1mL注入平皿中，立即倾注相应琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，测定所加的试验菌数。供试品对照组:各取1∶10供试液1、0.5、0.2mL，按试验组操作，不加菌液，测定样品本底菌。计算各试

5、验菌株的回收率，结果见表1。表1计数验证菌各菌株回收率结果由表1可见:黑曲霉的回收试验，当供试液为1mL·皿-1时，3次试验的回收率均即可达到70%以上;白色念珠菌当稀释至0.5mL·皿-1时，3次试验的回收率达到70%以上;而大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌3个菌株的回收率试验，要稀释至0.2mL·皿-1，3次验证的回收率才能均达到70%以上。因此本品的细菌计数、真菌及酵母菌计数均可用培养基稀释法检查:细菌计数用0.2mL·皿-1，真菌及酵母菌计数用0.5mL·皿-1。2.3.2控制菌检查法的验证本品为含有药材粉末投料的口服制剂,控制菌应检查大肠埃希菌和大

6、肠菌群，验证大肠菌群检查法时，采用大肠埃希菌作为试验菌。2.3.2.1大肠埃希菌检查法的验证取1∶10供试液10mL及大肠埃希菌菌液1mL加入100、200mL的BL增菌培养基中，按大肠埃希菌的检查法进行检验。2.3.2.2大肠菌群检查法的验证取1∶10供试液1mL及大肠埃希菌菌液1mL加入不少于15、30mL的胆盐乳糖发酵培养基中，按大肠菌群的检查法进行检验。由表2可知，试验组均检出大肠埃希菌，因此本制剂的大肠埃希菌和大肠菌群均可用常规法检查。4讨论本品含有木馏油、阿仙粉、黄柏粉等成分，有一定的抑菌作用，验证试验结果证明，本品对革兰阳性菌有较强的抑制作用。药典收载

7、的除去供试品抑菌作用的方法有培养基稀释法、薄膜过滤法、离心沉淀法等，或几法联用。由于本品是中成药，推断其抑菌作用不会太强，因此尝试采用培养基稀释法，通过扩大培养基的使用量，使供试品在培养基中稀释，结果各规定菌株的回收率均达到药典要求;控制菌则用常规法即能顺利检出试验菌。培养基稀释法操作简单，不需要特殊仪器设备，只需增加培养基量，即可很好地消除本制剂在试验条件下的抑菌作用问题，因此本方法简便快捷、准确有效，能很好地控制康腹止泻片的质量。表2控制菌验证结果【