保妇康栓微生物限度检查法的验证

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1、保妇康栓微生物限度检查法的验证【摘要】目的：消除保妇康栓的微生物限度检查法中的抑菌作用。方法：采用薄膜过滤法进行试验，加试验菌回收并且计算回收率。结果：该供试品对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉的回收率均高于70%，采用薄膜过滤法进行检验可满足要求。结论：薄膜过滤法可消除药品中抑菌物质的干扰。【关键词】微生物限度检查法；验证试验；薄膜过滤法；抑菌；回收率［ABSTRACT］Objective:ToeliminatetheboltUNIFEMHongmicrobiallimi

2、tstestoftheantimicrobialeffect.Method:Tousemembranefiltrationmethodtotest,testandcalculationofrecyclingandrecovery.Results:ThetestforproductsofEscherichiacoli,Staphylococcusaureus,Candidaalbicans,Bacillussubtilis,Aspergillusniger,therecoveryratesore,memb

3、ranefiltrationmethodcanmeettherequirement.Conclusion:Thefilmfiltrationcaneliminatedrugsinantibacterialmaterialinterference.［KEYicrobiallimitstest;Certificationtest;Membranefiltration；Antibacterial;Recoveryrate药品微生物限度检查法建立时应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证和控制菌检查方法的验证，以

4、确认所采用的方法是否适合于该药品的细菌、霉菌及酵母菌的测定和控制菌检查［1］。若药品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法和检查方法应重新验证［2，3］。有些制剂有抑菌作用,制备的供试液本身会影响微生物的生长，若不进行方法学验证，所采用的方法不一定适合该供试品的微生物限度检查［4］。系统的方法学验证可以避免因为选择方法不合理而造成漏检、误判，以保证结果的科学可靠。1材料1.1主要仪器、药品STV3型无菌检查薄膜滤器（浙江宁海白石药检仪器厂），303AS2型数显隔水式培养箱（上海浦东荣丰

5、科学仪器公司），SPX25型生化培养箱（上海跃进医疗器械厂）。保妇康栓（批号20060331,栓剂,海南碧凯药业有限公司）。1.2培养基及稀释剂玫瑰红钠琼脂培养基、营养琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、改良马丁琼脂培养基、改良马丁液体培养基、溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基、甘露醇氯化钠琼脂培养基、营养肉汤均由广东环凯微生物科技有限公司提供。1.3验证试验用菌种金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003、枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501、大肠埃希菌CMCC(B)44102、白色念珠菌CMCC(F)98001、黑

6、曲霉CMCC(F)98003、铜绿假单胞菌CMCC（B）10101，金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003、铜绿假单胞菌CMCC（B）10101均由海南省药品检验所提供，以上菌种所用菌株均未超过5代。2方法与结果2.1菌液制备（1）取经35～37℃培养18～24h的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的肉汤培养物1mL加9mL灭菌生理盐水，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5～10-7，控制细菌数约为50～100cfu/mL。（2）取经23～28℃培养18～24h的白色念珠菌液体培养物1mL加9mL

7、灭菌生理盐水，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5～10-7，菌数约为50～100cfu/mL。（3）取经23～28℃培养7d的黑曲霉菌斜面培养物，加3～5mL灭菌生理盐水洗下霉菌孢子，采用管口带有薄无菌棉花的毛细吸管吸出菌液，取1mL加9mL灭菌生理盐水，逐管10倍稀释为10-4，菌数约为50～100cfu/mL。2.2供试液的制备称取本品10g，溶于100mL无菌pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液中，作为1∶10的供试药液。2.3细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证2.3.1试验方法取1∶10供试液10mL

8、，过滤，用pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液冲洗2次，每张滤膜每次冲洗量为100mL，冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于相应的培养基平板上，每种培养基至少制备一张滤膜，置规定温度中培养24～72h。2.3.2冲洗量的验证取1∶10供试液10mL，过滤，分别用100、200、300mL的pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液冲洗，最后一次冲洗液中加入1mL金黄色葡萄球菌的菌悬液，过滤后取出滤膜，菌面朝上贴于相应培养基平板上，培养24～72h，结果见表1。表1冲