盐酸小檗碱片微生物限度检查法验证方案

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1、文件名称盐酸小檗碱片微生物限度检查法方法验证方案文件编号PA02-JF-C07起草人起草日期年月日审核人审核日期年月日批准人批准日期年月日执行日期年月日颁发部门版本号：1印数：分发部门分发数量010000000001验证小组人员及责任：1.1验证小组人员：小组职务姓名组长组员组员组员1.2责任：验证小组组长负责验证方案起草和编写，组织验证全过程的实施，提出验证报告。验证小组组员分别负责落实方案实施中各部分验证的具体工作。2.验证目的及标准来源：2.1验证目的：盐酸小檗碱片微生物限度试验采用薄膜过滤法进行检查。验证所使用的微孔滤膜能有效截留各类微生物、检验方法能消除盐酸小檗碱对各

2、类微生物的抑制作用。2.2.标准来源：《中国药典》2005版二部《中国药品检验标准操作规程》2005年版-8-3.设备、仪器3.1无菌室微生物限度检查应有单独的无菌室，每个无菌室应有独立的净化空气系统。3.1.1操作间操作间应安装空气除菌过滤层流装置。环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压，不低于4.9Pa。操作台上备有电子天平，乙醇灯，火柴，乙醇棉球，大、小橡皮乳头等。3.1.2缓冲间缓冲间内应有洗手盆，无菌衣、帽、口罩、拖鞋等。缓冲间内不得放置培养箱和其他杂物。3.1.3无菌室操作台消

3、毒擦拭后，先启动层流净化装置30min，将备妥的营养琼脂平板3个（经30～350C预培养48h，证明无菌落生长），以无菌方式移入操作间，置净化台左、中、右各1个，开盖，暴露30min后将盖盖上。在30～350C培养箱内倒置培养48h，取出检查。3个平板生长的平均菌落数不超过1个。3.1.4在每次操作前、后，用75%乙醇溶液或其他消毒液擦拭操作台及可能污染的死角。然后启动层流净化装置，同时用紫外杀菌灯照射30min。3.2仪器3.2.1恒温培养箱（30～350C）、生化培养箱（23～280C）、电冰箱、蒸汽灭菌器。3.2.2玻璃器皿烧杯、培养皿、量筒、试管及塞、吸管。玻璃器皿用前

4、应洗涤干净，吸管、量筒不挂水滴，无残留抗菌物质。吸管口上端距0.5cm处塞入约2cm适宜疏松的棉花，置牛皮纸袋中。锥形瓶、量筒、试管均应加硅胶塞或棉花塞。玻璃器皿均于高压蒸汽1210C灭菌30min，烘干或1600C干热灭菌2h，备用。-8-4培养基及其制备方法4.1营养琼脂培养基：取营养琼脂培养基32g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟。4.2玫瑰红钠琼脂培养基：取玫瑰红钠琼脂培养基30.5g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟。4.3胆盐乳糖培养基：取胆盐乳糖培养基33.6g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，1

5、21℃高压灭菌15分钟。注：培养基（生物试剂）由中国药品生物制品检定所生产。5验证用菌种验证用菌株大肠埃希菌（Escherichiacoli）﹝CMCC(B)44102﹞，金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）﹝CMCC(B)26003﹞，枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）﹝CMCC(B)63501﹞，白色念珠菌（Candidaalbicans）﹝CMCC(F)98001﹞，黑曲霉（Aspergillusniger）﹝CMCC(F)98003﹞。验证用微生物的稀释度和接种量菌种名称浓度/CFU·ml-1稀释级接种量/ml大肠埃希菌（Escher

6、ichiacoli）CMCC(B)44102金黄色葡萄球（Staphylococcusaureus）CMCC(B)26003枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）CMCC(B)63501白色念珠菌（Candidaalbicans）CMCC(F)98001黑曲霉（Aspergillusniger）CMCC(F)980035.9×1076.3×1086.7×1096.2×1087.6×10810-610-710-810-710-711111-8-6试液6.1靛基质试液6.1.1配制：取对二甲氨基苯甲醛10.0g，加入戊醇150ml，充分振摇，使完全溶解后，再取浓盐酸50m

7、l徐徐滴入，边加边振摇，以免骤热导致溶液色泽变深，置冰箱保存，备用。7稀释剂7.10.9%无菌氯化钠溶液：取氯化钠9.0g，加水溶解使成1000ml，121℃灭菌20分钟。7.2PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾3.56g，磷酸氢二钠7.23g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，分装，过滤，灭菌。8样品盐酸小檗碱片三批，由吉林平安行药业有限公司生产。9供试液的制备9.1取供试品1g，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至10mL，混匀，作为供试品溶液