不同生长期山楂叶中黄酮类化合物的含量测定

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1、不同生长期山楂叶中黄酮类化合物的含量测定作者：李宏伟，张守勤，窦建鹏，奚玉石【摘要】目的测定并比较不同生长期山楂叶中黄酮类化合物含量的差异。方法采用分光光度法和高效液相色谱法检测黄酮类化合物的含量。结果在不同的生长期，山楂叶中总黄酮和牡荆素鼠李糖苷的含量都在8月份最高,然后逐渐降低。结论以提取黄酮类化合物为目的的山楂叶最适宜在8月份采收。【关键词】山楂叶；黄酮类化合物；高效液相色谱法；超高压提取　　Abstract：ObjectiveToparethecontentsofflavonoidsin

2、HainedbyUVspectrophotometryandHPLC.ResultsAtdifferentgronosylvitexineinordertoobtainflavonoidsponentsfromHaPa以上的流体静压力作用于料液上，经过短时间提取后迅速卸压，然后再进行分离纯化的一种提取技术。本实验将超高压提取技术应用于山楂叶黄酮提取，大大缩短了样品的制备时间。　　1仪器与材料DL700超高压等静压机（上海大隆机器厂），日本岛津LC20A高效液相色谱仪，UV-2450紫外可见分光

3、光度计，MV110电子天平（上海天平仪器厂）。山楂叶采于吉林省吉林市昌邑区土城子乡，经鉴别为CrataeguspinnatifidaBge.var.MajorN.E.Br；牡荆素鼠李糖苷（MPbiomedicals）；芦丁对照品（中国药品与生物制品检定所）；冰醋酸为色谱纯；乙醇为分析纯。　　2方法与结果　　2.1总黄酮含量测定　　2.1.1对照品溶液的制备精密称取在干燥至恒重的芦丁对照品10mg，用50%乙醇定容至50ml容量瓶中，即得对照品溶液。　　2.1.2标准曲线的制备精密量取对照品溶液1

4、，2，3，4，5，6ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6min，加4%氢氧化钠溶液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15min，以相应试剂为空白，立即用分光光度法，在500nm的波长处测吸光度(A)，以吸光度为纵坐标，质量浓度（C）为横坐标，绘制标准曲线。回归方程为：C=0.077A，r=0.9998。　　2.1.3供试品溶液的制备精密称取山木楂叶粉末0.5g，准确加入50%乙醇25ml，混匀，压力为40

5、0mPa，提取时间为3min，过滤，取续滤液，即得供试品溶液。　　2.1.4样品测定精密量取上述待测液1ml于25ml容量瓶中，加水至6ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6min，加4%氢氧化钠溶液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15min，以相应试剂为空白，立即按照紫外－可见分光光度法，在500nm的波长处测吸光度值（A），按照回归方程计算含量。结果见表1。表1样品中总黄酮测定结果（略）　　2.2牡荆素鼠李糖苷的含量测定　　2.2.1色谱

6、条件RP-C18色谱柱250mm×4.6mm（5μm）；流动相以A：乙腈，B：0.5%乙酸水溶液梯度洗脱，起始时，A：20%，20min，A：20%，20.01min，A：28%，40min，A：40%；检测波长为340nm；流速0.8ml/min。　　2.2.2对照品溶液的制备精密称取在干燥至恒重的牡荆素鼠李糖苷对照品3.0mg，用50%乙醇定容至10ml容量瓶中，即得对照品溶液。　　2.2.3线性关系考察精密吸取牡荆素鼠李糖对照品溶液2，4，6，8，10μl进样，绘制标准曲线，回归方程为Y=

7、9×10-7X-0.0579，r=0.9995，牡荆素鼠李糖苷在0.5～2.5μg具有良好线性关系。　　2.2.4供试品溶液的制备精密吸取牡荆素鼠李糖对照品溶液2，4，6，8，10μl进样，绘制标准曲线，回归方程为Y=9×10-7X-0.0579，r=0.9995，牡荆素鼠李糖苷在0.5～2.5μg具有良好线性关系。　　2.2.5精密度实验精密吸取对照品溶液，重复进样5次，测定结果为RSD=1.58%(n=5)。　　2.2.6稳定性实验取一种供试品溶液，每隔2h进样10μl，测定结果为RSD=1

8、.17%(n=5)。　　2.2.7重复性实验取同一批号样品5份，按供试品溶液制备方法平行处理，依法测定，测定结果为RSD=2.01%。　　2.2.8回收率实验精密称取已知含量的样品数份，精密加入一定量的牡荆素鼠李糖苷对照品，按照含量测定方法进行测定，计算回收率为99.17%，RSD=1.32%(n=5)。　　2.2.9样品含量测定分别取不同生长期的的样品按供试品溶液制备方法处理，依法测定，计算含量。结果见图1及表2。表2样品中牡荆素鼠李糖苷测定结果（略）　　3讨论对山楂叶中的黄酮类化合物进行HP