hplc法测定蜂胶中黄酮类化合物的含量

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1、万方数据10中国养蜂APICULTUREOFCI-IINA2001年第52卷第3期[文章标号)0412．4367(2001)03．0010．02HPLC法测定蜂胶中黄酮类化合物的含量宋爱清刘杰(山西职工医学院，太原030012)摘要采用高效液相色谱(HPLC)法，在以甲醇一0．4％磷酸(85：15)为流动相，检测波长为360nm的色谱条件下，测定蜂胶中良姜素和高良姜素等黄酮类化合物的含量。检测结果提示HPLC法可作为测定蜂胶中黄酮失忆舍蝴舍量的行之有效的方法。关键词HPLC；蜂胶；良姜素；高良姜素[中图分类号]$896．6【文献

2、标识码]B蜂胶具有消炎、止痛、抗细菌、抗真菌、抗病毒和抗肿瘤以及增强机体免疫功能等作用⋯。它含有酚类、有机酸及酯类、黄酮类等复杂的化学成分。但蜂胶的有效成分主要是黄酮类，其中含有黄酮、黄酮醇和黄烷酮等，它们的含量决定了蜂胶的特殊药理作用乜]。所以，通过测定黄酮类化合物的含量可以作为检测、控制蜂胶质量的指标之一f3J。我们研究并建立了用高效液相色谱法测定蜂胶中黄酮类化合物含量的方法，以期达到为蜂胶的质量监控寻求一个快速、准确、有效和可靠的新方法。1仪器与试剂岛津LC一4A液相色谱仪，SPD一2A紫外检测器，C—R3A积分仪；良姜素

3、、高良姜素(均由中国药品生物制品检定所提供)；蜂胶(由山西省和顺县养蜂专业户提供)；甲醇、磷酸(均为A·R，北京化工厂产)，双重蒸馏水。2方法和结果内，再分剐依次精密加入高良姜索对照品溶液0．5、1．0、3．0、6．0、8．0、10ml，并用甲醇定容至刻度，摇匀。分别精密吸取上述混合溶液20”l，注入高效液相色谱仪，在本文色谱条件下，记录峰面积，以峰面积(A)对进样量(c)进行线性回归，其回归方程式分别是：A(良姜素)=65369．2C+29581，r=0．9998(n=6)；A(高良姜素)=76321．2C一5782r=0．9

4、997(n=6)，二者分别在0．0863～0．4372弘g和0．0527～0．4326pg范围内与积分面积呈良好的线性关系。2．5回收率试验：采用加样回收法。精密称取已知含量的冷冻粉碎蜂胶8份，分别用甲醇溶解、提取定容表1良姜素和高良姜素的回收率试验2．I色谱条件：色谱柱为ODS4．6×250nm；流动相为甲醇一0．4％磷酸溶液(85：15)；流速：1ml／min，检测波长为360nm，灵敏度为0．08AUFS；柱温为室温；进样量为20／A。2．2对照品溶液的制备：精密称取干燥至恒重的良姜素、高良姜素对照品各5．00mg，分别用

5、甲醇溶解并定容于50ml容量瓶中，即为对照品溶液。2．3供试品溶液的制备：精密称取冷冻粉碎的蜂胶5．00mg于烧杯内，加入15ml甲醇浸泡，搅拌，减压抽滤，并洗涤数次，其滤液转入50ml容量瓶中，最后用甲醇定量，作为供试品溶液。2．4标准曲线的绘制：分别精密量取良姜素对照品溶液0．5、1．0、3．0、6．0、8．0、10m1分别置于25ml容量瓶后，各准确加入良姜素、高良姜素对照品一定量，按样品分析方法操作，分别计算其回收率，各加入对照品量及测定结果见表1。2．6稳定性试验分别精密量取良姜素、高良姜素对照品和供试品溶液在0⋯12

6、4、8、12、24h不同时间进样测定7次，分别记录峰面积。对照品中良姜素和高良姜素的RSD分别是0．23％和0．36％；供试品液中两者的RSD分别是26％和0．33％。表明对照品和供试品溶液在24h内稳定性均良好。2．7精密度试验：精密量取良姜素和高良姜素对照品混合溶液连续进样6次，分别记录其峰面积，两者的RSD分别是0．52％和0．46％n=6)表明精密度良好。2．8样品测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶万方数据2001V01．52No．3中国养蜂APICULTUREOFCHINA液适量，注入色谱仪，依法测定，分别记录峰面

7、积，按外标法计算，结果供试品样品中良姜素含量为2．60mg％，高良姜素含量为1．82mg％。3讨论3．1良姜素和高良姜素在蜂胶中也证实其存在并得到分离H]。二者在本文色谱条件下，色谱基线平直，都呈现单一色谱峰，分离度良好，并且峰形对称，无拖尾现象，杂质也无干扰。3．2蜂胶是含有树脂状物的粘性物质，不溶于水，易溶于甲醇、乙醇和甘油等有机溶剂。经过反复筛选本文选定溶解性高、无干扰的甲醇为溶剂。为克服蜂胶的粘性、样品处理时需冷冻粉碎；在用甲醇溶解提取后，需要减压抽滤，除去不溶性杂质。3．3蜂胶中的黄酮类主要含有黄酮及黄酮醇，在空气、受

8、热等条件下均有被氧化破坏的可能性。所以，蜂胶的供试品和对照品溶液，不宜高温加热，也不宜过长时间保存，需低温冷藏。3．4根据蜂胶的组成成分、特性和有关文献报道r4】，我们研究并建立了用高效液相色谱法测定蜂胶中黄酮含量的方法。该法简便，快速、准确、稳定及回收率高和线