hplc法测定素清丸中黄芩苷的含量

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1、HPLC法测定素清丸中黄芩苷的含量【摘要】建立HPLC法测定素清丸中黄芩苷的含量。方法采用PhenomenexC18Gemini（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱，柱温为室温，以甲醇-0.5%磷酸溶液（50：50）为流动相;流速为1.0ml/min;检测波长：280nm。结果黄芩苷进样量0.501～2.506μg范围内与峰面积呈良好线性关系（r=0.9999）,平均回收率为99.10%,RSD=0.50%（n=5）。结论该方法简便,结果准确,可作为本品质量控制的有效方法。【关键词】HPLC素清丸黄芩苷【Abstract】Objectiv

2、eToestablishaHPLCmethodforthequantitativedeterminationofBaicalininSuqingpills.MethodsThedeterminationedonPhenomenexC18column（250mm×4.6mm,5μm）obilephaseconsistedofmethanol-0.5%phosphoricacidsolution（50:50）andthecolumntemperaturebient.Theflol/min.Thedetection.ResultsThemethod

3、shoethodissimpleandaccurateandcanbeusedforthequalitycontrolofSuqingpills.【KeypoenexC18柱Gemini（250mm×4.6mm，5μm）；黄芩苷对照品（中国药品生物制品检验所，批号1110715-200514）；甲醇为色谱纯，磷酸为优级纯。素清丸为连云港中医院制剂室提供（批号：20060521、20060612、20060803）。2方法与结果2．1色谱条件流动相为甲醇：0.5%磷酸溶液（50：50），流速：1.0ml/min，检测波长：280nm。柱温：室温

4、；理论板数按黄芩苷计7500。2．2对照品溶液的制备精密称取黄芩苷对照品50.12mg，置50ml量瓶中，加流动相超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。精密量取对照品储备液5ml置50ml量瓶中,用流动相稀释到刻度，作为对照品溶液。2．3样品溶液的制备样品研细，精密称取的样品细粉3.12g用流动相50ml,加热回流3h，然后转移置100ml容量瓶中，超声30min使溶解，并用流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45μm水溶性滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。2．4线形关系的考察取对照品溶液，分别进样5、10、15、20、25μl，即得含相

5、当于黄芩苷0.5012、1.0024、1.5036、2.0048、2.506μg的对照品溶液，测定峰面积，以黄芩苷质量为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标，进行线性回归，得出回归方程以及线性范围，Y=1.78×107X－6521，r=0.9999，黄芩苷进样量在0.501～2.506μg范围内峰面积与进样量呈良好线性。2．5进样精密度试验在上述色谱条件下，取黄芩苷对照品溶液重复进样6次20μl,记录峰面积，RSD为0.6%。2．6重复性试验精密称取同一批号的样品（批号：20060521），按照样品测定的方法操作重复操作6次，测得黄芩苷平均含量和RS

6、D,结果表明：重复性试验RSD为1.6%，表明本法重现性较好。2.7加样回收试验精密称取已知含量的样品5份，每份加入精密称定的对照品混匀，照样品含量方法操作，计算回收率见表1。表1加样回收试验2.8稳定性试验取样品（批号：20060521）新配的供试品溶液分别在0，1，3，5，8h进样10μl,测定其中黄芩苷的峰面积，结果RSD为1.2%，表明供试品溶液在8h内稳定。2.9样品的含量测定取3批样品，按上述供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，依上述色谱条件测定含量，分别进样10μl，记录色谱图，按外标法计算，结果见表2，图1。表2样品含量测定结

7、果3讨论参考《中国药典》有关黄芩苷含量测定方法〔1〕,分别选用甲醇-0.5%磷酸溶液（50：50）；甲醇-0.1%磷酸溶液（50：50）和乙腈-0.5%磷酸溶液（28：72）三种流动相实验，黄芩苷的峰型没有太大差异，分离效果不太理想，但是采用甲醇-0.5%磷酸溶液（50：50）作为流动相，与样品周围的杂质峰能够完全分开，分离效果较为理性。用纯甲醇和流动相两种溶剂分别对样品进行超声提取,结果显示,仅仅用甲醇超声提取,样品提取不是很完全，选用流动相先加热回流3h，提取率高,再测定黄芩苷的含量，为了避免其他成分的干扰，每针样品进样分析时间不得少于3

8、5min。【