异株荨麻茎叶中黄酮类化合物含量测定方法的研究论文

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1、异株荨麻茎叶中黄酮类化合物含量测定方法的研究论文何斌，王兰珍，谢秀丽，刘勇【摘要】目的研究异株荨麻茎叶中黄酮类化合物的测定方法。方法分别采用Al（NO3）3络合分光光度法和HPLC法测定异株荨麻茎叶中黄酮类化合物的含量，并对测定结果进行比较；同时以黄酮类化合物的含量为指标，优选出了超声波辅助法提取异株荨麻茎叶中黄酮类化合物的最佳条件。结果超声波辅助法的最佳提取条件：体积分数为80%的乙醇溶液、料液比为1∶30，提取温度为60℃；HPLC法同时测定异株荨麻中芦丁和槲皮素的高效液相色谱条件：色谱柱选用DiamosnilTM钻石C18（250mm×4

2、.6mm,5μm），柱温25℃.freell/min，检测波长370nm。结论Al（NO3）3络合分光光度法操作方便，简单，快速；HPLC法可以同时准确地测定出样品中不同黄酮类化合物的含量，精确性和灵敏度高。两种方法测定的总黄酮含量相差甚微，应根据不同的测定目的，选择适当的测定方法。【关键词】异株荨麻黄酮类化合物高效液相色谱法Abstract：ObjectiveTostudyondeterminationmethodsofthecontentsofflavonoidsinstemsandleavesofUrticadioicaL..Method

3、sThecontentsofflavonoidsintheextractsfromUricaldioicaL.stemsandleavesinedandparedbyAl(NO3)3colorimetryandHPLC.ThemethodtheleavesandstemsofUrticadioicalL..C18(25mm×4.6mm,5μmbyvolume)containing0.4%phosphoricacidusedasmobilephaseatflol·min-1forgradientelution.UVdetector,andthec

4、olumntemperatureethodofAl(NO3)3colorimetryiseasyandquick.ThemethodofHPLCisaccurateandsensitive.Itcansimultaneouslyandexactlydeterminethecontentsofdifferentflavonoids.Theresultsshoethodsareextremelyequal.Fordifferentstudyobjective,propermethodcanbechosen.Key752型紫外-可见分光光度计(上海光

5、谱仪器有限公司)；KQ-500DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；SENCOR-201型旋转蒸发仪(上海申顺生物科技有限公司)；AnkeTDL-5型离心机(飞鸽牌)；F钻石C18(250mm×4.6mm,5μm)；柱温25℃；检测波长370nm；流动相为甲醇：0.4%磷酸=55∶45；流速1.0ml/min；进样量20μl。2.3.5标准液配制槲皮素标准液：精确称取槲皮素标准品5.4mg，置于100ml棕色容量瓶中，用少量色谱甲醇摇匀溶解，再定容至刻度线，即得52.54μg/ml的标准液浓度。芦丁标准液：精确称取芦丁标准品5.7m

6、g，置于100ml棕色容量瓶中，用少量色谱甲醇摇匀溶解，再定容至刻度线，即得52.27μg/ml的标准液浓度。混合标准溶液的制备:分别移取上述两种标准液各35ml于100ml容量瓶中，用力摇晃，使其混合均匀，即得混合标准液。2.3.6标准曲线绘制用微量进样器分别进样混合标准溶液2，4，6，8，10μl于高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录峰面积。以峰面积(A)作纵坐标，溶液浓度(C)作横坐标绘制标准曲线，见图2～3。结果表明：峰面积与浓度呈良好的线性关系，经最小二乘法回归处理得：芦丁线性方程为A=2110.1C-16.331，R2=0.99

7、96；槲皮素线性方程A=4237.8C-31.849，R2=0.9975。2.3.7精密度实验取同一混合标准液，按上述色谱条件，连续进样5次测定其峰面积，计算芦丁、槲皮素的峰面积RSD分别为2.95%和3.35%,表明精密度良好。2.3.8样品测定移取样品溶液适量，用0.45μm的过滤器过滤，用取样器取20μl过滤液上高效液相色谱仪，按“色谱条件”项下的条件测定，结果见表5，芦丁的平均含量为336.738μg/g，槲皮素的平均含量为8.467μg/g。表5HPLC测定样品中芦丁和槲皮素的含量（略）2.3.9重复性实验取同一批异株荨麻，在连续5d

8、内用“样品溶液的制备”项下的提取方法进行提取，按上述色谱条件进样测定，结果表明该方法的重复性较好。芦丁的平均含量为331.727μg/g,RED＝3.