异株荨麻茎叶中黄酮类化合物含量测定方法的研究

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1、异株荨麻茎叶中黄酮类化合物含量测定方法的研究作者：何斌，王兰珍，谢秀丽，刘勇【摘要】　　目的研究异株荨麻茎叶中黄酮类化合物的测定方法。方法分别采用Al（NO3）3络合分光光度法和HPLC法测定异株荨麻茎叶中黄酮类化合物的含量，并对测定结果进行比较；同时以黄酮类化合物的含量为指标，优选出了超声波辅助法提取异株荨麻茎叶中黄酮类化合物的最佳条件。结果超声波辅助法的最佳提取条件：体积分数为80%的乙醇溶液、料液比为1∶30，提取温度为60℃；HPLC法同时测定异株荨麻中芦丁和槲皮素的高效液相色谱条件：色谱柱选用DiamosnilTM钻石C18（250mm×4.6mm,5μm）

2、，柱温25℃，流动相为甲醇：0.4%磷酸=55∶45，流速1.0ml/min，检测波长370nm。结论Al（NO3）3络合分光光度法操作方便，简单，快速；HPLC法可以同时准确地测定出样品中不同黄酮类化合物的含量，精确性和灵敏度高。两种方法测定的总黄酮含量相差甚微，应根据不同的测定目的，选择适当的测定方法。【关键词】异株荨麻黄酮类化合物高效液相色谱法　　Abstract：ObjectiveTostudyondeterminationmethodsofthecontentsofflavonoidsinstemsandleavesofUrticadioicaL..Meth

3、odsThecontentsofflavonoidsintheextractsfromUricaldioicaL.stemsandleavesinedandparedbyAl(NO3)3colorimetryandHPLC.ThemethodtheleavesandstemsofUrticadioicalL..C18(25mm×4.6mm,5μmbyvolume)containing0.4%phosphoricacidusedasmobilephaseatflol·min-1forgradientelution.UVdetector,andthecolumntempe

4、ratureethodofAl(NO3)3colorimetryiseasyandquick.ThemethodofHPLCisaccurateandsensitive.Itcansimultaneouslyandexactlydeterminethecontentsofdifferentflavonoids.Theresultsshoethodsareextremelyequal.Fordifferentstudyobjective,propermethodcanbechosen.　　Key752型紫外-可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司)；KQ-500DB型数控

5、超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；SENCOR-201型旋转蒸发仪(上海申顺生物科技有限公司)；AnkeTDL-5型离心机(飞鸽牌)；F)；样品提取所用乙醇和氯仿均为分析醇(北京化工厂)；槲皮素和芦丁对照品均购自中国药品生物制品检定所。　　1.3材料　　样品采于北京林业大学西山林场，在105℃杀青15min后自然晾干，经中草药粉碎机粉碎，过80目筛后，于干燥器中保存、备用。　　2方法与结果　　2.1样品脱脂处理取样品（异株荨麻）粉末适量，于100ml具塞三角瓶中,加60ml氯仿溶液，摇匀，在45℃下，超声处理30min，取出趁热进行离心（3000r/min,5m

6、in)，除去上层液后再加入60ml氯仿溶液，在同样的条件下重复脱脂3次，将脱脂后的样品粉末自然风干。　　2.2分光光度法　　2.2.1提取条件的选择提取溶剂的选择：精确称取脱脂后的样品1g于100ml具塞三角瓶中，分别加入70％，80％，90％的乙醇溶液30ml和1.5N的盐酸10ml，摇匀，称重；在60℃、100Hz下,超声处理30min，取出冷却至室温，称重，补足失重,进行离心(3000r/min,5min)，取上清液于三角瓶中，下层沉淀重新分别加入70％，80％，90％的乙醇溶液30ml和1.5N的盐酸10ml，重复提取3次，合并上清液，在60℃下浓缩于10ml

7、容量瓶中，分别用70％，80％，90％的乙醇溶液定容至刻度，用分光光度法测定黄酮含量见表1。结果表明，80％的乙醇溶液提取效率最高。表1乙醇体积分数对提取率的影响（略）　　提取料液比的选择：精确称取脱脂后的样品1g于100ml具塞三角瓶中，分别加入80％的乙醇溶液20，30，40ml和1.5N的盐酸10ml，摇匀、称重；在60℃，100Hz下,超声处理30min，取出冷却至室温，称重、补足失重、离心(3000r/min,5min),取上清液于三角瓶中，下层沉淀重新分别加入80％的乙醇溶液20，30，40ml和1.5N的盐酸10ml,重复提取3次，合并