三七总苷对佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞释放一氧化氮的影响

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1、三七总苷对佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞释放一氧化氮的影响.L.编辑。作者：姚茹冰胡兵赵智明修春英蔡辉【摘要】　　［目的］研究三七总苷（PNS）对佐剂性关节炎（AA）大鼠腹腔巨噬细胞释放一氧化氮（NO）的影响。［方法］大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂诱发大鼠AA模型，采用硝酸还原酶法检测AA大鼠腹腔巨噬细胞释放的NO。［结果］体外给药PNS0.4mg/ml，作用4h时，增加AA大鼠NO释放（P<0.05）；体外给药PNS0.2mg/ml及0.4mg/ml，作用8h时，抑制AA大鼠NO释放（P<0.05，P<0.01）

2、；体外给药PNS0.8mg/ml及PNS1.6mg/ml，作用24h时，增加AA大鼠NO释放（P<0.01，P<0.05）。［结论］PNS体外给药随浓度及作用的时间变化，对AA大鼠释放NO有双向调节作用，PNS抑制AA大鼠腹腔巨噬细胞释放NO可能在AA治疗中起一定的作用。【关键词】三七总苷佐剂性关节炎一氧化氮　　Abstract：［Objective］Toinvestigatetheinfluenceofpanaxnotoginsengsaponins（PNS）onproductionofNitricOxide（NO）b

3、yperitonealmacrophagesofratsacrophagesofratsinedbynitratereductase.［Results］PNS0.4mg/mlincreasedNOsynthesisandsecretionfromperitonealmacrophagesofAAratsinvitroafterfourhours（P<0.05）；PNS0.2mg/mland0.4mg/mlreducedNOsynthesisandsecretionfromAAratsinvitroafterEighthours

4、respectively（P<0.05，P<0.01）；PNS0.8mg/mland1.6mg/mlincreasedNOsynthesisandsecretionfromAAratsinvitroaftertacrophagesofAAratses.PNSreducedNOsynthesisandsecretionfromperitonealmacrophagesofAArats，aybeeffectiveontreatingAA.　　Keyg／ml的乳剂，于每鼠右后足跖皮内注射0.05ml致炎。2周后分离腹腔巨噬细胞

5、。　　1.2.2DMEM培养液配制　　1.2.3腹腔巨噬细胞的分离纯化及培养大鼠颈动脉放血，腹腔注入预冷的磷酸盐缓冲液（PBS）（PH7.2）10ml灌洗腹腔，轻揉腹部后取腹腔液。1200r/min离心10min，吸弃上清，用DMEM培养液混悬沉淀，调至5×108/L，加入24孔培养板中，每孔1ml，置入37℃、5%CO2培养箱内差速贴壁1h。吸弃培养液，用DMEM培养液洗3次，以除去非粘附细胞，获单层腹腔巨噬细胞。每孔加入含10%小牛血清DMEM培养液及LPS（终浓度为10μg/ml），并按如下6个实验组给予不同的处理，每组4孔，

6、地塞米松（DM）作为阳性对照组。6个实验组依次是：AA组、AA+PNS0.2mg/ml组、AA+PNS0.4mg/ml组、AA+PNS0.8mg/ml组、AA+PNS1.6mg/ml组、AA+DM107mmol/L组。置37℃、5%CO2培养箱中分别培养1、4、8、24h，每次取0.2ml上清液，-20℃保存待测。　　1.2.4一氧化氮检测NO化学性质活泼，在离体标本液中主要氧化成亚硝酸盐，因此，测定标本中亚硝酸盐的浓度可作为衡量NO水平的指标。本试验取冻存培养液上清100μl，室温溶解后，依一氧化氮试剂盒说明书操作，以硝酸还原酶

7、法测定标本液中的亚硝酸盐浓度，550nm，0.5cm光径，测吸光度值。NO含量（μmol/L）＝（测定管吸光度-空白管吸光度）/（标准管吸光度-空白管吸光度）×标准品浓度（100μmol/L）。　　1.2.5统计学方法采用SPSS11.5统计软件进行数据处理，测定值以均值±标准差（x±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，组间比较采用LSD检验。以P<0.05为差异有显著性统计学意义。.L.编辑。　　2结果　　各组腹腔巨噬细胞释放NO量随时间变化的情况见表1。腹腔巨噬细胞培养1h时，各组间释放NO量的差异无统计学意义（P>

8、;0.05）；培养4h时，AA+PNS0.4mg/ml组及AA+DM107mmol/L组与AA组相比NO释放量升高，差异有显著性意义（P<0.05）；培养8h时，AA+PNS0.2mg/ml组与AA组相比NO释放量降低，差异有