阿魏酸钠抑制高糖诱导的系膜细胞增殖

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1、阿魏酸钠抑制高糖诱导的系膜细胞增殖作者：石明隽罗华肖瑛桂华珍郭兵张国忠【摘要】目的探讨阿魏酸钠(SF)对高糖诱导的原代培养系膜细胞(GMC)增殖的作用及其机制。方法原代培养肾小球系膜细胞，分为正常组、甘露醇组、高糖组、高糖加不同浓度SF组，分别于处理后24、48h收集细胞。用MTT法检测细胞增殖；流式细胞术测定cyclinD1和细胞周期；免疫细胞化学检测p53蛋白的表达。结果48h内，高糖促进GMC增殖，使GMC由G1期进入S期细胞比例增高；同时cyclinD1蛋白表达上调而p53蛋白的表达减少；SF能明显对抗高糖的这种

2、作用，其作用随SF浓度的增加、作用时间的延长而加强。结论SF可能通过抑制cyclinD1蛋白表达和促进p53蛋白生成，从而抑制高糖诱导的GMC增殖。【关键词】系膜细胞；高葡萄糖；阿魏酸钠；细胞周期；cyclinD1；p53【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectsandmechanismofsodiumferulate(SF)ontheproliferationofmesangialcellsinducedbyhighglucose.MethodsTheprimaryglomer

3、ularmesangialcellsal,mannitol,highgloucoseandhighgloucoseplusdifferentconcentrationSFgroups.CellseasuredbyMTTassay,andcellcycleandcyclinD1easuredthroughfloetry.p53protEinexpressionmunocytochemistry.ResultsHighglucosesignificantlypromotedmesangialcellproliferation

4、andupregulatedtheexpressionofcyclinD1,anddoesangialcellproliferationinducedbyhighglucoseedependedmanner.ConclusionsSFcaninhibitproliferationofmesangialcellsinducedbyhighglucosebysuppressingthecyclinD1expressionandincreasingthelevelofp53protEInpossibly.【Keyferul

5、ate;CyclinD1;p53糖尿病肾病(DN)的发病机制十分复杂，至今尚未完全阐明，但显著的高血糖和高尿糖应是引起DN的始动因素和中心环节〔1〕。肾小球系膜细胞(GMC)为肾小球固有细胞，有实验证实，高糖可刺激其活化进而增生，产生多种细胞因子和炎症介质，合成并分泌细胞外基质成分，导致肾小球硬化〔2，3〕，但也有不少研究认为高糖并没有促进GMC增殖而仅仅是肥大〔4，5〕。阿魏酸钠(SF)是一种非肽类内皮素拮抗剂，具有广泛的药理作用，已有作者用其治疗DN取得良好效果〔6〕，然而其作用机制未明。本研究拟用原代培养GMC，观

6、察高糖培养环境中GMC细胞周期及p53和cyclinD1蛋白表达的变化以及SF对其影响，探讨SF的作用机制，为临床合理用药提供新的实验依据。1材料与方法1.1主要试剂及设备SF(吉林西点药业科技发展股份有限公司，批号：05020909)；甘露醇(石家庄四药有限公司)；MEM培养基(美国Gibco公司)；L谷氨酰胺、4甲基偶氮唑蓝(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)、胰蛋白酶(美国Sigma公司)；胎牛血清(FCS，Hyclone)；抗cyclinD1抗体、p53抗体、SABC试剂盒(武汉博士德)。CO2孵箱(美国REV

7、CO)；倒置显微镜(OLYMPUS)；酶标仪(美国BioRad)；流式细胞仪(美国BD)；CM2000B型生物医学图象分析系统(北航)。1.2方法1.2.1大鼠原代GMC培养大鼠双肾灌洗后，分级筛网滤过分离肾小球，并用Ⅳ型胶原酶消化处理，种植法体外培养大鼠肾小球系膜细胞。培养细胞按已建立的方法鉴定〔7〕，确定为系膜细胞，供实验用。1.2.2实验分组正常组(5.5mmol/LD葡萄糖)；SF+正常组(SF240mg/L＋5.5mmol/LD葡萄糖)；甘露醇组(5.5mmol/LD葡萄糖+24.5mmol/L甘露醇

8、)；高糖组(30mmol/LD葡萄糖)；SF+高糖培养组(SF60、120、240mg/L+30mmol/LD葡萄糖)。各组分别于培养24和48h时收集细胞用于检测。1.2.3MTT法检测系膜细胞增殖将原代GMC分组，每组三复孔，细胞周期同步后，SF作用20h和44h，每孔加入MTT(5mg/ml)20μl，继续