氯霉素酶联免疫分析方法的建立

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1、第18卷第4期同　位　素Vol.18　No.42005年11月Nov.2005JournalofIsotopes氯霉素酶联免疫分析方法的建立林　斯1,韩世泉,刘一兵,许文革,官国英(中国原子能科学研究院同位素研究所,北京　102413)摘要:以兔抗氯霉素多抗为包被抗体,氯霉素(CAP)辣根过氧化物酶连接物为标记物,四甲基联苯胺(TMB)为显色底物,建立了氯霉素直接竞争酶联免疫分析(CAP2EIA)方法。本方法灵敏度为0.046μg/L,批内变异系数<10%,批间变异系数<24%,回收率62%～14

2、5%。用牛奶样品预处理所得上清液为稀释液做得稀释实验,相关方程为y=3.988x-0.234,相关系数为0.999。标准曲线范围为0.1～10μg/L。关键词:氯霉素(CAP);酶联免疫分析(EIA);辣根过氧化物酶(HRP);建立中图分类号:R446.61　　文献标识码:A　　文章编号:100027512(2005)0420211205EstablishmentofanEnzymeLinkedImmunoassayforChloramphenicolLINSi,HANShi2quan,LIUYi

3、2bing,XUWen2ge,GUANGuo2ying(DepartmentofIsotope,ChinaInstituteofAtomicEnergy,Beijing102413,China)Abstract:AsensitiveandspecificEIAforchloramphenicol(CAP)isestablishedbyusing oneanti2CAPpolyclonalantibody.Theantibodyiscoatedonthemicrotiterplate.Thela2

4、belledcompoundishorseradishperoxidase(HRP)conjugateofchloramphenicol.TMB2H2O2solutionisusedasthesubstrateofHRP.Thesensitivityoftheassayis0.046μg/L. Theintra2andinter2CVsof10samplesarelowerthan10%and24%,respectively.Thean2alyticalrecoveryis62%～145%.The

5、correlativeequationisy=3.988x-0.234,r=0.999,usingmilksupernatantasbuffer.Theanalyticalrangeis0.1～10μg/L.Keywords:chloramphenicol(CAP);enzymeimmunoassay(EIA);horseradishperoxidase(HRP);establishment　　氯霉素对人的造血和消化系统具有严重的物链传递给人类并产生过敏反应。为了规范动毒副作用,有可能引发再生障碍

6、性贫血;对于少物性食品中抗生素的残留量,质检部门需要一种数人还会引起视神经炎、皮疹等不良反应[1]。因[1]。因快速、简便、准确的检测方法。目前常用的检测此国内外都规定动物性食品中氯霉素残留量为氯霉素的方法有液相色谱法、放射免疫分析法、不得检出。氯霉素主要用作农牧产品饲料添加酶联免疫分析法[2,3]。其中酶联免疫分析法灵剂以降低畜类的患病率,由于代谢缓慢容易沿食敏度较高、特异性强、快速、经济,且无放射性污收稿日期:2005201207;修回日期:2005204224作者简介:林斯(1979～),男

7、(汉族),福州人,硕士,核技术应用专业©1994-2006ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.http://www.cnki.net212同　位　素　　　　　　　　　　　　　　　　　第18卷　染并已在许多领域中得到广泛应用。本工作拟表1　标记物稀释实验采用直接竞争法建立一种可用于商业化推广的氯霉素酶联免疫分析方法。稀释倍数光密度NSBS020000.1153.1071　材料与方法40000.0973.090

8、1.1　试剂和仪器80000.0762.541兔抗氯霉素多抗(浓度为0.815g/L),由原160000.0892.233子高科股份有限公司医学二部提供。氯霉素240000.0811.833(CAP)、辣根过氧化物酶(HRP)、牛血清白蛋白480000.0901.587(BSA)、水溶性碳二亚胺(EDC)、N羟基琥珀酰亚胺酯(NHS)等均为美国Sigma公司产品,纯 μg/L,结果列于表1。根据表1数据,结合工作度等级均为分析纯。显色底物、2mol/L硫酸、 经验,选择标记物的工作