survivin在急性髓系白血病中的表达及aml1a对小鼠造血干祖细胞的调节作用及其在白血病中的致病作用分析

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1、中国医学科学院北京协和医学院(清华大学医学部)硕士学位论文位形成的融合蛋白AMLl厄TO的识别序列，两者结合后可促进Survivin的表达。在干扰Survivin表达后，由AMLl／ET0介导的对C／EBPa、MPO(myeloperoxidase)以及G-CSF的抑制作用解除，从而促进细胞分化，诱导细胞凋亡20。有文献报道，与FLT3野生型相比，FLT34TD可以上调Survivin的表达，从而使细胞凋亡受阻21。但以上结果仅限于体外实验，而在伴有t(8；2I)易位以及伴有FLT34TD突变的AML患者体内Survivin的表达是否明显高于其他类型的白血病患者

2、尚未有研究涉及。Survivin与凋亡通路蛋白Bcl2，Bcl．xL以及MCL．1的表达是否有相关性也不清楚。本研究通过免疫组织化学染色方法检测Survivin在AML患者中的表达情况，并进一步分析Survivin表达与BCL-2、Bcl．xL和MCL．1表达之间的相关性及其与临床参数的关系，探讨其在白血病中的意义。7中国医学科学院北京协和医学院(清华大学医学部)硕士学位论文一、材料与试剂(一)研究对象材料与方法全部标本取自2010年9月至2012年4月中国医学科学院血液病医院病理科存档的组织蜡块。63例初诊的AML患者为住院治疗的患者，其中男32例，女3l例，

3、年龄15-62岁，中位年龄40岁。63例AML按2008版WHO急性髓系白血病诊断、分型标准，其中伴有t(8；21)遗传学异常者29例，inv(16)者3例，AML无成熟型2例，AML有成熟型9例，急性粒单核细胞自血病6例，急性原始单核细胞／急性单核细胞白血病10例，急性红白血病4例。预后标准参考2011年美国国立综合癌症网(NationalComprehensiveCancerNetwork)指南。对照组lO例，为非血液系统肿瘤(即免疫性血小板减少性紫癜，ITP)患者。患者所接受的诱导化疗方案有标准剂量HAD方案和中剂量HAD方案两种；巩固化疗方案有DA方案和

4、HD．A(大剂量阿糖胞苷)方案，具体如下：标准剂量HAD方案：HHT2mg／m2／d×7d，DNR40mg／m2／d×3d，Ara-C100mg／m2／d×7d．中剂量HAD方案：HHT2mg／m2／d×7d，DNR40mg／m2／dX3d，Ara-C100mg／m2／d×4d&29／m2／d×3d．DA方案：DNR45-60mg／m2／d×3d，Ara-C100mg／m2／dX7d．HD．A方案：39／m2q12h×3d(二)主要试剂兔抗人Survivin单克隆抗体兔抗人BCL-2单克隆抗体兔抗人MCL．1单克隆抗体兔抗人Bcl-xL单克隆抗体苏木素染色液8美

5、国abcam公司美国CST公司上海研域公司中国医学科学院北京协和医学院(清华大学医学部)硕士学位论文DAB染显色试剂盒二甲苯无水乙醇(三)主要溶液配制1．磷酸盐缓冲液(PBS)NaClKCll(】№P04Na2HP04·12H20去离子水定容至1L，pH7．2．7．4。分装后常温保存。2．3％H202甲醇溶液30％H202溶液甲醇定容至500ml，现配现用。8．090．292．9910ml上海生物生工公司天津市化学试剂三厂3．O．5Mol／LEDTA溶液Na2EDTA·2H20186．1g去离子水定容至1L，NaOH溶液调节PH=0．8。分装后常温保存。(四)主

6、要仪器石蜡包埋机轮转切片机(LEICARM20255型)展片机(ZPJ．1A型)电热恒温烤箱(DK．600A型)9德国SM公司天津天利航空机电公司上海森信公司中国医学科学院北京协和医学院(清华大学医学部)硕士学位论文自动修复仪(PTlink型)自动染色仪(AutostainerLink48型)光学显微镜(BH型)显微镜摄像系统(AH．V型)lO丹麦Dako公司日本OLYMPS公司中国医学科学院北京协和医学院(清华大学医学部)硕士学位论文二、实验方法(一)病理学方法取上述63例急性髓系白血病患者的骨髓蜡块标本及10例非血液系统肿瘤即ITP患者的骨髓蜡块标本切片，切

7、片厚度为2-3pro，每个标本连续切片5张。抗Survivin抗体以膀胱癌患者组织蜡块标本作为阳性对照，抗Bcl—xL抗体以肺癌患者组织蜡块标本作为阳性对照，而抗BCL-2抗体以及抗MCL．1抗体则以淋巴瘤患者淋巴结蜡块标本作为阳性对照。(二)免疫组织化学染色方法1．原理免疫法是将带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的显色反应，抗体和靶抗原结合之后，形成抗原抗体复合物。如将抗体(或抗原)与某种显色剂偶联，抗原抗体复合物即可成为在显微镜下可见的图像，从而可以确定组织中是否存在某种抗原(抗体)。本实验中应用辣根过氧化物酶标记已知抗体，然后

8、与组织标本在一定条件下反