银杏叶提取物对ages诱导大鼠hsc增殖抑制作用

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1、银杏叶提取物对AGEs诱导大鼠HSC增殖抑制作用［摘要］目的探讨不同浓度晚期糖基化终产物(AGEs)对体外培养的大鼠肝星状细胞(HSC)增殖的影响，并观察不同浓度银杏叶提取物(EGb)对其增殖有无抑制作用。方法体外合成AGEs,MTT法观察不同浓度的AGEs对HSC增殖的影响及不同浓度EGb对AGEs促HSC增殖的抑制作用。结果当培养液中AGEs浓度彡50mg/L时，12〜48h内检测发现HSC较正常对照组增殖明显并呈时间及剂量依赖性(P1.3药物处理采用无血清RPMI1640细胞培养液溶解EGb，

2、37°C恒温水浴箱中加热30min，离心观察EGb完全溶解，调节pH值和渗透压，经0.45um滤器过滤除菌后，4°C贮存备用。1.4细胞培养将冻存于液氮中的HSC(大鼠HSC-T6细胞株，已活化)取出，迅速置37°C水浴解冻复苏后，采用含100kU/L青霉素、100kU/L链霉素、100mL/L胎牛血清的RPMI1640培养液，在37°C、50mL/LC02及饱和湿度条件下培养，隔天换液，待细胞将近长满培养瓶鹿时，用2.5g/L胰蛋白酶消化，按1:3传代，所有实验均取对数生长期细胞。1.5实验分组1

3、.5.1AGEs对HSC增殖的影响分4组，每组6孔：正常对照组（AN组，AGEsOmg/L）、AGEs低浓度组（AL组，AGEs25mg/L）、AGEs中浓度组（AM组，AGEs50mg/L）、AGEs高浓度组（AH组，AGEs100mg/L）。1.5.2EGb对AGEs引起的HSC增殖的影响分5组，每组6孔：正常对照组（EN组，AGEs、Egb各Omg/L）、AGEs对照组（EA组，AGEs50mg/L+Egb0mg/L）、AGEs+低剂量EGb组（EL组，AGEs50mg/L+Egb50mg/L

4、）、AGEs+中剂量EGb组（EM组，AGEs50mg/L+Egb100mg/L）、AGEs+高剂量EGb组（EH组，AGEs50mg/L+Egb150mg/L）。1.6细胞培养及MT7法测定药物对HSC增殖的影响将分离、培养的HSC以2X107/L密度接种于96孔培养板，每孔200uL。细胞贴壁后，改用浓度为20mL/L胎牛血清的1640培养液同步饥饿培养24h，使培养细胞处于GO期。然后换用无血清培养基并分别按实验分组方法加入处理因素，继续分别培养6、12、24、48h结束时，每孔加5g/L的M

5、TT贮存液20pL，37°C、浓度为50ml/LC02继续孵育4h。吸弃上清，每孔加入二甲基亚砜（DMSO）200uL,微量振荡器振荡lOmin至结晶溶解，空白对照调零，酶标仪上测定490nm波长处吸光度值（0D）。试验重复3次。1.7统计学处理采用SPSS14.0统计软件，进行多组间比较，数据以（）表示，采用t检验，P综上所述，EGb可能通过抑制AGEs而阻止HSC的增殖，但对HSC是否有直接抑制作用，有待研究。同时体外增殖的HSC是否有促纤维化活性，抑制其增殖是否就有抗肝纤维化作用，亦有待后期实

6、验进一步证实。[参考文献][1]GertzHJ，KieferM.ReviewaboutGinkgobilobaspecialextractEGB761(nkgo)[J].CurtPharmDes，2004,10(3)：261-264.[2]解正高，昊星伟，庄朝荣，等.银杏叶提取物对豚鼠视神经横断伤后视网膜神经节细胞结构及功能的保护作用[J].中西医结合学报，2009，7(10)：940-946.[3]许利剑，张建平，汪宝林，等.银杏叶提取物防治急性重症胰腺炎大鼠内毒素血症的实验研究[J].江苏大学学

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