银杏叶提取物对大鼠肝硬化的治疗作用及其机制研究

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1、银杏叶提取物对大鼠肝硬化的治疗作用及其机制研究【摘要】目的研究银杏叶提取物（extractofginkgobiloba，EGb）对大鼠肝硬化的影响并探讨其机制。方法用四氯化碳加高脂饮食法造成大鼠肝硬化模型，银杏叶片以20mg/kg、15mg/kg、10mg/kg的量给药30天，测定血清总蛋白（T-P）、白蛋白（ALB）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）、血清透明质酸（HA）、层粘蛋白（LN）和Ⅲ型前胶原（PCⅢ）的含量，计算白蛋白与球蛋白的比例（A/G）。TUNEL测肝细胞凋亡指数

2、。结果与模型组相比，银杏叶提取物各组能显著降低ALT、AST、TBIL含量，增加白蛋白含量，提高白/球比例，显著降低血清HA、LN和PCⅢ水平；显著降低细胞凋亡指数。并具有剂量依赖性。结论银杏叶提取物对大鼠肝硬化具有保护作用，其机制可能是通过抗肝细胞凋亡来实现的。【关键词】银杏叶提取物肝硬化肝细胞细胞凋亡银杏树叶的提取物（extractofginkgobiloba，EGb）具有扩张血管，调节血脂，抑制血栓形成；改善记忆；清除自由基等多种药理作用。临床用于治疗心脑血管方面的疾病和癌症。已发现银杏叶提取物对肝纤维化、

3、肝癌等具有一定的治疗作用〔１-6〕，临床上已有银杏叶提取物成功用于治疗失代偿期肝硬化的例子，本文主要研究银杏叶提取物——银杏叶片（每片含总黄酮醇苷9.6mg，萜类内脂2.4mg）对大鼠肝硬化的作用，并进行初步的机制探讨。1材料与方法1.1试验材料：实验动物：60只SD大鼠，体重180-220g，购自河南省实验动物中心。动物合格证号：SCXK（豫）2005-0001，动物房温度为25±2℃，标准大鼠颗粒饲料饲养，自由饮水。银杏叶片，扬子江药业集团生产，批号08011301。使用时用0.5%的CMC-Na混悬，配

4、成不同浓度。1.2主要试剂及仪器：四氯化碳（CCl4）：郑州化学试剂二厂；羧甲基纤维素钠（CMC-Na）：上海浦东化学品有限公司，批号：20071026；透明质酸（HA）、层粘蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）放免试剂盒均购自北京北方免疫试剂研究所；其它试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。BT2000全自动生化分析仪，意大利Vialicenza，Roneoo156。TUNEL试剂盒,购自北京中杉金桥生物技术有限公司。1.3模型制备　：60只大鼠适应性饲养1周，随机分为造模组50只和正常组10只。采用复合造模方法复

5、制大鼠肝硬化模型〔７〕，每周2次皮下注射四氯化碳，0.3ml/100g体重，共10周。造模开始第1-2周均以20%猪油、0.5%胆固醇、79.5%玉米面混合饲料喂养，第3-9周以0.5%胆固醇和99.5%玉米面混合饲料喂养。整个造模期间以30%乙醇作为饮料让大鼠自由饮用。正常组则以正常饲料和纯净水喂养。造模过程中死亡3只。实验10周末造模组随机抽取3只经肝组织病理切片确认造模成功后予以分组治疗。　　将造模成功的44只大鼠随机分为4组，每组11只，即模型组、EGb高、中、低剂量组，分别灌胃给予0.5%的CMC

6、-Na及20mg/kg、15mg/kg、10mg/kg的EGb。给药30天，给药过程中模型组死亡一只。给药结束后，大鼠禁食14小时，戊巴比妥钠麻醉，腹主动脉取血后处死动物，取肝脏。离心分离血清，全自动生化分析仪测定血清总蛋白（T-P）、白蛋白（ALB）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）含量，计算白蛋白/球蛋白（A/G）比例；放免法测定血清中HA、LN、PCⅢ含量。肝细胞凋亡原位检测按照试剂盒说明书操作进行，凡满足下列条件之一者即确定为凋亡肝细胞：（1）出现凋亡小体；（2）核呈新月形

7、；（3）核浓缩。每张切片选择5个具有代表性的高倍视野（400×），共计数500个肝细胞，取阳性细胞平均百分率作为凋亡指数（Apoptosisindex，AI），即：凋亡指数=（5个高倍视野内阳性肝细胞数之和/500）×100%。　　1.4统计学处理：　　所有数值以±S，利用SPSS11.0软件进行单因素方差分析、两两比较及相关性分析，p<0.05具有显著性差异，p<0.01具有极显著性差异。2结果　　2.1银杏叶片对肝硬化大鼠血清中ALT、AST、TBIL的影响：　　肝硬化模型建立后，肝细胞受损，细胞

8、中的酶释放进入血液中，导致血清中ALT、AST含量明显升高；同时，肝功能受损时，胆红素不能与葡萄糖醛酸结合进入胆汁而在血液中蓄积，引起血液中总胆红素水平升高。经EGb干预后，与模型组相比，银杏叶提取物高中低剂量组可明显降低血清中ALT、AST、TBIL的含量，并呈剂量依赖性。　　2.2银杏叶片对肝硬化大鼠血清中T-P、ALB、A/G的影响　　肝硬化大鼠肝脏受损后，合成蛋白