银杏叶提取物对大鼠胶质瘤作用机制体内实验的研究

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1、中文摘要银杏叶提取物对大鼠胶质瘤作用机制的体内实验研究摘要目的：脑恶性胶质瘤是最常见的颅内原发性肿瘤，约占颅内肿瘤的44．6％。虽然手术治疗是目前临床的首选方法，但胶质瘤是以浸润性、扩展性生长为特征，与正常脑组织间常无明显边界，多侵犯一个以上脑叶，故手术难以根除，且胶质瘤细胞对射线不敏感，化疗药物又难以透过血脑屏障，目前尚缺乏满意的治疗手段，因而具有很高的复发率，死亡率高，治疗效果差，手术治疗联合化疗、放疗后患者的平均生存期仍然不到一年。临床上手术、放疗、化疗等治疗方法及术后的预防都是与药物治疗分不开的，所以研究一种高效低毒的药物来治疗脑胶质瘤成为神经外科最受关注的研究课题

2、。从银杏叶中提取的药用有效成分已经基本明确，主要是黄酮苷和包括银杏内酯和白果内酯在内的特有的萜烯，简称银杏叶提取物(GinkgobilobaExtract，GbE)。法、德等国家从20世纪70年代开始利用GbE制成药品，取得了很好的治疗效果。我国也相继进行了银杏叶提取物的研究开发，杏花雨注射液是新研制的银杏叶提取物注射液，其黄酮苷含量为49．79％，萜烯类为4．4％。本课题采用银杏叶提取物注射液对大鼠脑胶质瘤模型进行干预，探讨其抗肿瘤的作用机制，从而为银杏叶提取物在临床治疗方面提供有利的理论依据。方法：1、细胞培养：体外培养大鼠C6胶质瘤细胞，对大鼠中文摘要C6胶质瘤细胞株

3、进行复苏，加入含1O％胎牛血清的RPMI—1640培养基中37℃进行培养后，取对数生长期的C6胶质瘤细胞，消化、吹打均匀于显微镜下计数，并制成细胞悬液。接种前采用台盼蓝据染法测定细胞存活率达95％以上。2、SD大鼠脑胶质瘤模型建立：微量注射器抽取101．tl细胞悬液，含有约1．O×106C6细胞，接种部位为大鼠右侧尾状核。接种后10天，行强化头部M砌检查，确定目标部位有肿瘤形成，模型制作成功。3、将模型鼠(荷瘤鼠)随机分为三组，每组分别给予相应治疗措施。对照组：腹腔内注射二甲基亚砜(DMSO)0．2ml，生理盐水lml，每日一次，共七次；银杏叶提取物组：每天腹腔内注射杏花雨

4、注射液35mg／kg(依据文献经验选择)。生理盐水lml，每日一次，共七次；顺铂组：腹腔内注射DMSOO．2ml，顺铂lmg／kg(溶于lml生理盐水)，每日一次，共七次。4、药物干预前后分别行MRJ及增强扫描检查，直观观察肿瘤的生长情况(形态及大小改变)；免疫组织化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)标记指数；免疫组织化学法检测脑胶质瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)水平的表达。探讨银杏叶提取物体内培养的SD大鼠C6胶质瘤肿瘤细胞增殖的影响。5、数据以均数士标准差表示，统计学处理采用spssl1．O统计软件进行单因素方差分析，t检验进行分析。P<0．05为差异有显著性意义

5、；P<0．01为差异有高度显著性意义。中文摘要结果：胶质瘤模型建立成功，三个实验组大鼠证实颅内均有肿瘤生长。治疗组大鼠均较对照组大鼠生存状态为佳，生存期延长，三个实验组平均生存期分别为20天、23天与28天。银杏提取物治疗效果明显，对C6胶质瘤细胞生长具有明显的抑制作用。顺铂组与银杏提取物均有一定地抑瘤作用，以后者的抑瘤作用较强，肿瘤体积较对照组明显缩小。M砌增强扫描能较好的反应颅内C6胶质瘤生长情况。MRI影像扫描显示：肿瘤均匀强化，边界清楚，同侧脑室受压，中线结构移位明显。肿瘤大体组织标本观察，肿瘤占据右侧大脑半球大部，向周围浸润生长，可见大片坏死液化组织。治疗后各组与

6、对照组影像对比，肿瘤体积增大不明显，明显受抑制。对照组肿瘤体积为97．8+3．6mm3，肿瘤体积较大，而治疗组大鼠经过干预因素作用之后，瘤体的生长受到不同程度的抑制，顺铂组和银杏提取物组的肿瘤体积分别为62．3土7．6mm3，55．1+3．8mm3，各组与对照组比较均有显著性差异，P<0．01。治疗组肿瘤体积与对照组肿瘤体积相比有不同程度的缩小，说明药物均对肿瘤有抑制作用。顺铂组和银杏提取物的抑瘤率分别为36．2％和43．7％，抑瘤率均>30％，显示肿瘤对此两种治疗方案均敏感，治疗有效果。光镜下观察，对照组的瘤细胞生长活跃密集成群，瘤细胞异型性明显，体积大，胞质红染，细胞核

7、大深染，核分裂像多见，少数细胞可见核固缩、浓染。治疗后可见瘤细胞数量明显减少，肿瘤细胞坏死，可见大量的凋亡细胞，核分裂象较少见，亦可见坏死的细胞及出血灶。免疫组化结果分析，PCNA阳性细胞的胞核呈黄色或棕黄色。对照组肿瘤细胞阳性细胞密度高，治疗组可见肿瘤内PCNA阳性细胞密度下降，核PCNA中文摘要阳性强度减弱，随浓度增加阳性率呈下降趋势，治疗组核PCNA阳性细胞密度显著低于对照组。(P<0．01)VEGF阳性细胞染色定位于胞浆内，对照组胞浆内含棕黄色颗粒密集，呈阳性表达，治疗组可见肿瘤内胞浆内着色浅，反应颗粒减少