人卵巢癌中多药耐药基因与多药耐药相关蛋白的表达及

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1、人卵巢癌中多药耐药基因与多药耐药相关蛋白的表达及【关键词】卵巢癌［Abstract］ObjectiveTostudytherelationshipbetultidrugresistancegene（MDR1），multidrugresistanceprotein（MRP）otherapybeforeoperation.MethodsTheexpressionofMDR1andMRPin68casesofovariancancerand20normalovarytissueerasechainreaction（RT-PCR）.R

2、esultsInnormalovaryandovariancancer，thepositiveofMDR1or（P<0.05），butnosignificantrelationshiptothehistologicaltype（P>0.05）.ThenonresponderstobinationchemotherapyexhibitedhigherrationsofMDR1andMRPexpressionthantheresponders（P<0.05）.ConclusionMulitplegeneexpr

3、essionisinvolvedindrugresistanceinovariancancer.TheexpressionofMDR1orMRPishigherinovariancancerthanthatinnormalovarytissue.TheexpressionofMDR1andMRPiscloselyrelatedtothetumordifferentiationandtheresponsetochemotherapy.［Keys;genesexpression;MDR1;MRP卵巢癌是女性生殖系统主要的恶性肿瘤之

4、一，其病死率居妇科肿瘤首位，占女性癌症患者病死率的第5位。化疗是治疗卵巢恶性肿瘤的主要辅助手段，但癌细胞的耐药严重妨碍了抗肿瘤药物效能的发挥。国内外研究表明，肿瘤耐药涉及细胞内药物浓度降低、药物靶分子改变、代谢解毒、DNA损伤修复功能增强等多种机制，与多种耐药相关基因有关［1］。本研究采用定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PDR）同时测定多药耐药基因（MDR1），多药耐药相关蛋白（MRP）在卵巢恶性肿瘤组织中表达。旨在探讨卵巢癌MDR1和MRP表达与化疗耐药的关系，从而寻找一种可以预测化疗耐药的标志物。1资料与方法1.1一般资料

5、选择2005年1月~2006年12月间在我院妇产科手术治疗的卵巢癌患者共68例，年龄19~65岁，平均51.7岁。所有手术标本均经病理检查证实。另取正常卵巢组织20例作为对照（系子宫肌瘤手术同时切除卵巢获得的正常卵巢组织）。卵巢癌包括子宫内膜样癌10例，透明细胞癌8例，浆液性乳头状囊腺癌（浆液癌）25例，黏液性乳头状囊腺癌（黏液癌）17例，无性细胞瘤2例，内胚窦瘤6例。其中，临床Ⅰ期5例，Ⅱ期9例，Ⅲ期42例，Ⅳ期12例，患者均在术后1周内开始化疗。共接受了6~13个疗程的化疗。化疗方案以CAP（顺铂+阿霉素+环磷酰胺）或泰素

6、加PC（顺铂+环磷酰胺）方案为主。1.2方法1.2.1标本收集所有病例均为初诊患者，术前均未接受化疗，在手术切除后1h内，将新鲜癌组织标本置于液氮中保存。1.2.2引物设计根据从Genbank中查到的这两种基因序列设计聚合酶链反应（PCR）引物，见表1，内参基因为肌动蛋白（β-actin）。表1PCR引物及产物长度1.2.3RNA提取参照TRIZOL试剂盒（美国GIBCOBRL公司）说明书进行提取RNA。1.2.4逆转录（RT）合成CDNA将RNA稀释为1μg/μl。取5μlRNA加5×RTbuffer4μl，dNTP（2mm

7、ol/L）1μl，Oligo（dT）（100μg/μl）2μl，三蒸水3μl，65℃水浴变性5min，加Rnasin（20u/μl）0.5μl，AMV（10u/μl）1μl，（均为美国Promega公司产品）。42℃水浴60min。95℃5min灭活AMV。1.2.5PCR扩增扩增体系：10×buffer1μl，dNTP（2mmol/L）1μl，引物（5μmol/l）各1μl，甲酰胺5μl，Cdna100ng，TagDNA聚合酶（4μg/μl）0.3μl，加三蒸水补充体积至10μl。94℃变性5min后进入循环，94℃变性40

8、s，55℃（68℃）退火40s，72℃延伸1min，30个循环后72℃10min。1.2.6电泳80V电压下，2%琼脂糖凝胶电泳1h，紫外光下检查有无特异条带。1.2.7PCR产物定量分析用KODAK数字成像系统对PCR产物照相，用软件分析条带吸光度值。1.2.8临床疗效评定