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1、痛必定注射液对坐骨神经结扎性慢性损伤模型大鼠脊髓【摘要】目的观察痛必定注射液对坐骨神经结扎性慢性损伤模型(CCI)大鼠脊髓N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NR1)的影响。方法雄性SD大鼠30只,随机分为正常组、CCI组和痛必定组。采用RT-PCR技术测定各组大鼠脊髓内NR1表达的变化。结果CCI组较正常组脊髓内NR1mRNA表达量明显升高(P<0.001)；CCI＋痛必定组NR1mRNA表达受到明显抑制(P<0.001)。结论痛必定注射液在脊髓水平的镇痛机理与其抑制NR1mRNA的表达有关。【关键词】痛必定注射液；N-甲基-D-天冬氨酸受体1；RT-PCR；
2、动物模型Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofTongbidinginjectiononexpressionofN-methyl-D-aspartate(NMDA)receptor1mRNAinthespinalcordofchronicconstrictioninjury(CCI)rats.MethodsThirtymaleSpragru-Dalydividedintocontrolgroup(groupA),CCIgroup(groupB)andTongbidinggroup(groupC),tenratforeahgroup.T
3、hechangesinNR1mRNAexpressioninthespinalcorderasechainreaction(RT-PCR)techniques.ResultsTheexpressionofNR1mRNAinthespinalcordinimalincontrolgroup,CCIinducedsignificantincreaseintheexpressionofNR1mRNAinthespinalcordandTongbidingsignificantlyinhibitedtheincreaseinNR1mRNAexpression.ThereRNA
4、expressionintheCCIratsspinalcordmaycontributetoanalgesicmechanismsofTongbidinginthespinaldorsalhorn.KeyRNA；RT-PCR；animalmodel痛必定注射液由4种中药(有效成分或部位)组成,其动物实验和临床应用均显示和杜冷丁[1-2]有相似的镇痛效果,但无明显成瘾性,其镇痛作用产生的机理尚未完全清楚。谷氨酸/天冬氨酸受体是中枢神经系统中最重要的兴奋性神经递质/受体系统,它参与了机体多种生理和病理过程,如学习记忆、神经元可塑性变化等。研究认为,天冬氨酸受体在神经源性
5、疼痛的产生和维持中起关键作用[3]。本实验采用RT-PCR技术观察痛必定注射液对于坐骨神经结扎性慢性损伤模型(CCI)大鼠脊髓N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NR1mRNA)表达变化的影响,探讨其镇痛机理。 1材料与方法 1.1动物及分组 雄性arker(华美公司产品)；Takara试剂盒(大连宝生物公司)；Primer由奥科生物工程公司合成。 1.3取材 1%异戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉大鼠,快速取出腰段脊髓,放入液氮内保存；取材结束后,将标本放入-80℃冰箱待用。 1.4引物设计 NRl-F：5’-GTCGGTATCAGGAATGCG-3’,
6、NRl-R：5’-GGTGCTCGTGTCTTGGA-3’,扩增片段长度330bp；β-action-F：5’-GATTGCCTCAGGACATITCTG-3’,β-action-R：5’-GATTGCTCAGGACATTCTG-3’,扩增片段长度620bp。 1.5实验步骤提取RNA：组织0.1g,剪碎研磨＋RNA裂解液1mL,加200μL氯仿混匀,13000r/min、4℃离心15min,吸上清＋500μL异丙醇,4℃放置30～60min,13000r/min、4℃离心15min,弃上清,沉淀＋1mL70%酒精漂洗1次,13000r/min离心15min,弃上清
7、,沉淀加dd.H2O50μL。逆转录合成cDNA：取2μLRNA65℃变性3min,加入反应缓冲液,总体积为20μL,42℃反应60min,95℃5min,终止反应,加水稀释至l00μL。PCR扩增产物分析：取10μLPCR产物在2%琼脂糖凝胶上电泳,溴化乙啶染色后,紫外灯下观察RT-PCR扩增产物。 1.6统计学方法采用SPSS9.0软件进行统计学处理；组内比较用t检验；组间比较用单因素方差分析,并以q检验比较两两差异。 2结果 经RT-PCR扩增后获得受体NR1、β-action带,凝胶图像分析仪分析电泳结果,计算NR1与β-action比
