抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(mrsa)卵黄免疫球蛋

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1、抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)卵黄免疫球蛋毕业:黄清松,罗深秋,林元藻,曾位森单位:南方医科大学基础学院,广东广州510515;广东药学院医学生物学教研室,广东广州510006;广东药学院生物化学与分子生物学教研室,广东广州510006【摘要】目的观察鸡卵黄中抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin瞨esistantstaphylococcusaureus,MRSA)抗体的含量、纯度、及稳定性。方法用耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)作为抗原免疫Leghorn鸡;通过改良水稀释法提取卵黄中的IgY;双紫外光波长测定抗体含量,SDS睵AGE电泳检测抗体纯度;RSA)抗

2、体的含量、纯度、及稳定性。方法用耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)作为抗原免疫Leghorn鸡;通过改良水稀释法提取卵黄中的IgY;双紫外光波长测定抗体含量,SDS睵AGE电泳检测抗体纯度;RSA)  HUANGQing瞫ong,LUOShen瞦iu,LINYuan瞶ao,ZENGedicalSciences,SouthernMedicalUniversity,Guangzhou510515;DepartmentofMedicalBiology,GuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou510006;DepartmentofBiochemi

3、stryandMolecularBiology,GuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou,Guangdong510006,China)  Abstract:ObjectiveToobservetheyield,purity,source,andstabilityofthemethicillin瞨esistantstaphylococcusaureus(MRSA).MethodsTakenthemethicillin瞨esistantstaphylococcusaureus(MRSA)asantigenimmunedLeghornfoprov

4、edethod.Antibody’scontentinedUV/VISspectrophotometer,andantibodypurityinedbyRSA);immunoglobulinofyolk(IgY);antibody  免疫球蛋白(immunoglobulin)是具有抗体活性的1种糖蛋白,主要存在于血浆中,也见于其他体液、组织和1些分泌液中。人血浆内的免疫球蛋白可分为5类,即免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白D(IgD)和免疫球蛋白E(IgE),其中IgG是最主要的免疫球蛋白。而母鸡血液中的免疫球蛋白可传递到鸡卵黄中,并且在

5、鸡发育过程中起保护作用,此种免疫球蛋白称为鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)[1]。IgG是存在于鸡卵黄中的主要免疫球蛋白,而IgM和IgA则主要存在于血清蛋白中[2]。IgY属多克隆抗体,多克隆抗体在疾病的诊断和防治方面具有许多特定优点,通常1次性大量制备是相当困难的,而多次制备又导致抗体的均1性差。母鸡1经免疫应答后,可从其卵黄中不断获得特异性的抗体。IgY纯度高、特异性强,不会像其他哺乳动物产生的抗体那样会发生交叉血清反应或过敏反应,因而它是最安全的生物制剂,可替代免疫小鼠、豚鼠或兔等哺乳动物所制备的抗体而大量生产。近年来,IgY的研究和应用是免疫学领域的热点和10分活跃的课题。耐甲氧西

6、林金黄色葡萄球菌是引起院内感染的重要致病菌,其致病性强,对多种抗菌药物耐药,在治疗上10分棘手。本文用耐甲氧西林金黄色葡萄球菌作为抗原免疫母鸡制备了抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌IgY[3,4],并对其理化性质和生物学活性进行了研究,旨在为其以后的诊断和防治应用奠定基础。  1材料与方法  1.1材料  1.1.1动物Leghorn鸡,25周龄,购于华南农业大学实验动物中心,合格证号:2007A025,常规饲养。  1.1.2试剂Tris睭Cl缓冲液;硫酸铵;PBS缓冲液;SDS睵AGE成套电泳试剂;考马斯亮蓝R250(购自北京索莱宝科技有限公司);聚苯乙烯酶标板(96孔,浙江黄岩新丰塑料

7、制品厂出品);兔抗鸡卵黄免疫球蛋白IgG(上海生物制品所血液制品室提供)。  1.1.3菌种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA标准菌株ATCC25923)获自中国药品生物制品鉴定所。  1.1.4仪器高速冷冻离心机(HC3018R型,科大创新股份有限公司);电泳仪(DYY睮I2,北京61仪器厂);酶联免疫检测仪(MR2000型,南京思腾医疗器械有限公司);微量进样器。  1.2方法  1.2.1免疫抗原的制备耐甲氧西林金黄色葡萄球菌经接种,摇瓶

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