抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(mrsa)卵黄免疫球蛋白(igy)的制备与性质研究论文

《抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(mrsa)卵黄免疫球蛋白(igy)的制备与性质研究论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)卵黄免疫球蛋白(IgY)的制备与性质研究论文黄清松，罗深秋，林元藻，曾位森【摘要】目的观察鸡卵黄中抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillinresistantstaphylococcusaureus,MRSA)抗体的含量、纯度、来源及稳定性。方法用耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)作为抗原免疫Leghorn鸡；通过改良水稀释法提取卵黄中的IgY；双紫外光波长测定抗体含量,SDSPAGE电泳检测抗体纯度；RSA).MethodsTakenthemethicillinresistantstaph

2、ylococcusaureus(MRSA)asantigenimmunedLeghornfoprovedethod.Antibody’scontentinedUV/VISspectrophotometer,andantibodypurityinedbyRSA);immunoglobulinofyolk(IgY);antibody免疫球蛋白(immunoglobulin)是具有抗体活性的一种糖蛋白，主要存在于血浆中，也见于其他体液、组织和一些分泌液中。人血浆内的免疫球蛋白可分为5类，即免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（

3、IgM）、免疫球蛋白D（IgD）和免疫球蛋白E（IgE）,其中IgG是最主要的免疫球蛋白。而母鸡血液中的免疫球蛋白可传递到鸡卵黄中，并且在鸡发育过程中起保护作用.freelol/LPBS缓冲液洗涤3次，将菌液调成2×109/mL备用。取等量的菌液和不完全福氏佐剂(羊毛脂∶液体石蜡=7∶3)混合，每毫升混合液中加入卡介苗2.5mL，充分乳化后作为免疫抗原备用。1.2.2母鸡免疫12只产蛋母鸡随机分成实验组和对照组,每组6只。实验组每只每次注射1mL免疫原，同时注射4个部位:双翅膀皮下和左右背部皮下注射，每周1次，连续注射3周。免疫后第16天测定鸡

4、血清IgG效价(1∶2000)，第21天开始拣取免疫蛋。对照组用相同方法注射生理盐水。以后每月强化免疫1次。1.2.3抗MRSA卵黄免疫球蛋白(IgY)的分离和纯化采用改良水稀释法(RSA用10%（φ）甲醛固定过夜后用pH8.5碳酸盐缓冲液稀释为3×108cfu/mL。②包被96孔酶联板，4℃下放置72h。③依次加入不同预处理后的IgY稀释液(每样品各做2孔)；兔抗鸡IgG(稀释浓度1∶1000)；底物液显色30min后滴加1滴2mol/L硫酸终止反应。④490nm比色。检测所用洗涤液为0.05%Tol/LPBS，阳性对照为未处理IgY稀释液，

5、阴性对照为未免疫鸡蛋卵黄提取液物。２结果与分析2.1IgY的抗原性蛋黄提取物和鸡血清经免疫印迹试验，显示二者均在高分子量附近出现单一的特异性酶染色条带，说明卵黄提取物和鸡血清中目的条带均为鸡IgG分子，具有相同的抗原性。表明卵黄中的IgY为鸡血清中IgG传输而来，并且鸡血清中的IgG与IgY分子量相同。有报道［7，8］鸡血清IgG分子量为180kD，由67～70kD的重链和22～30kD的轻链形成四聚体。IgY中的重链有4个稳定区，而哺乳动物IgG的重链只有3稳定区，IgY多出的一个稳定区为绞链区。见图1。2.2IgY含量提取液经280nm和2

6、60nm波长测定出蛋白的含量平均为13.83mg/mL蛋黄液。2.3IgY纯度如图2所示，经SDSPAGE电泳，卵黄液提取物基本呈现为一条带,通过凝胶扫描显示其纯度高达95%。鸡血清中该带纯度不足50%，且含有较多低分子量和高分子量带，见图3。1-2:蛋黄IgY;3-4:鸡血清IgG图1IgY抗体免疫印迹（略）Fig.1RSAIgY，实验证实具有良好的耐热、耐酸碱的理化特性。IgY抗体安全环保、来源丰富、造价低、抗体含量高、特异性强，可作为诊断试剂应用于早期、快速、灵敏诊断疾病或感染。耐甲氧西林的金色葡萄球菌(MRSA)，其致病性强，在全球范

7、围内感染率不断增加,成为包括泌尿系统在内的各种感染的重要致病菌之一，也是引起院内感染的重要致病菌［10］。临床上，将万古霉素作为治疗MRSA感染的首选药物，但万古霉素有较强的不良反应，且随着MRSA感染的迅速增加和万古霉素的用量增加，已出现了对万古霉素产生耐药的MRSA［11］，因此在治疗上十分棘手。抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌IgY有可能为临床治疗MRSA感染提供新的手段，具有一定的应用前景。【