代谢型谷氨酸受体5在大鼠急性脑缺血中的变化

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1、代谢型谷氨酸受体5在大鼠急性脑缺血中的变化：张茂林刘俊平杨巧莲周立社吴跃华【摘要】目的：观察大鼠大脑皮质中代谢型谷氨酸受体5（metabotropicglutamatereceptor5,mGluR5）在脑缺血不同时段的表达及其动态变化的规律，探讨其在急性脑缺血中变化的意义。方法：35只雄性CAO）模型，至上述规定时间点取大脑组织，行HE染色，用光学显微镜观察神经元损伤程度；用免疫组织化学技术判断神经元阳性表达的强弱；用形态分析系统检测各组mGluR5表达的灰度值。结果：各手术组mGluR5表达均高于假手

2、术对照组及正常对照组，与正常对照组相比，缺血1h其表达即有升高，至12h达高峰。而假手术对照组与正常对照组相比无统计学意义。结论：急性脑缺血可引起mGluR5表达上调，提示mGluR5参与了局灶性脑缺血损伤，可能促进了缺血性脑血管病的发展。但结合以前的研究，我们推测其上调也可能是一种为清除谷氨酸（Glu）而作出的反应性增高，是一种维持机体平衡的自我保护机制。【关键词】脑缺血；代谢型谷氨酸受体5　　AbstractObjecive:ToobservetheexpressionofmGluR5andthedy

3、namicregulationinthecortexofratsiaindifferentphasesandtoinvestigateitssignificanceinacuteischemia.Methods:Thirty-fivemaleetabotropicglutamatereceptor5;RatImmunohisitochemistry　　目前关于谷氨酸受体的研究很多，但多集中在离子型谷氨酸受体NMDA及其拮抗剂上。随着研究的深入，代谢型谷氨酸受体（metabotropicglutamater

4、eceptors,mGluRs）在神经疾病中的作用日益受到重视。mGluR5参与了中枢神经系统（S）的许多病理生理过程，但目前的研究并不深入。为了研究mGluR5在脑缺血中的作用机制，我们在MCAO模型基础上，动态研究mGluR5在缺血性脑血管病中表达的变化，以待从分子水平揭示mGluR5在脑缺血中的作用机制。　　1材料与方法　　1.1实验动物及材料健康plus广谱试剂盒、DAB显色试剂盒、APES、中性树胶为迈新生物技术（福州）产品。　　1.2实验方法　　1.2.1动物分组将动物随机分为正常对照组（NC

5、）、脑缺血后1h组、3h组、6h组、12h组、24h组（手术组，IG）及假手术对照组（SOC）,每组5只。　　1.2.2动物模型制备大鼠大脑中动脉缺血模型采用Koixumi和Longa等方法[1]，大鼠用3%戊巴比妥钠（0.1～0.15mL/100g）腹腔注射麻醉。麻醉大鼠仰卧固定于手术台上，颈部正中切口，分离右侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）及颈内动脉（ICA）。电凝ECA分支，结扎游离ECA主干。分离ICA主干至翼腭动脉（PPA），结扎PPA。ECA残端剪一小口将拴线插入，轻推尼纶线尾端经CC

6、A分叉部沿ICA入颅，进线深度由分叉部计算约18.5±0.5mm。这样便制成了大脑中动脉闭塞模型。假手术组除不插尼纶线外，其余步骤同缺血组。　　1.2.3组织切片制备分别在所须时间点，给予大鼠3%戊巴比妥钠0.5mL腹腔注射麻醉后断头取脑，自额极至枕叶分A、B、C、D、E5等份取C脑片置于4℃4%多聚甲醛磷酸缓冲液固定24h，常规脱水，浸蜡，包埋，制成5μm厚冠状切片。　　1.2.4光镜观察取各组大鼠组织切片，经HE染色后，用光学显微镜观察神经元损伤程度；用免疫组织化学技术判断神经元阳性表达的强弱；用形态

7、分析系统检测各组mGluR5表达的灰度值。　　1.2.5免疫组化法检测mGluR5采用辣根氧化酶链霉卵白素染色（SP法）。　　1.3图像分析采用江苏省捷达科技公司的形态分析系统进行图像分析，每张切片随机选取10个单位面积，测量免疫组化染色的灰度值。　　1.4统计学分析采用SPSS10.0统计软件，各组数据均以均数±标准差（x±s）表示，两组间数据比较采用t检验，并进行方差齐性检验。P<0.05视为有统计学意义。　　2.2免疫组化结果免疫组化阳性细胞信号呈棕黄色，在正常组织内mGluR5主要位于细胞膜

8、和胞浆内(图3)，缺血后大脑皮层mGluR5阳性神经元显著增加，有些神经元胞浆内着色亦增强(图4)。与相应时间点HE染色结果比较，发现mGluR5强阳性神经细胞以缺血灶及其周围部位最为显著，但一些缺血较重的组织内看不到阳性神经元或仅有少量染色。另外，可见缺血灶内胶质成分呈颗粒状，背景染色较正常组浅。　　图1假手术对照组大鼠脑皮质（HE，×200）（略）　　图2脑缺血后24h大鼠脑皮质（HE，×200）（略）　　图3假手术对照组