hplc测定荜茇三味散中胡椒碱的含量

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1、HPLC测定荜茇三味散中胡椒碱的含量那顺朝克图王烈群刘宏婧白广翠朱晓宇【摘要】目的：建立荜茇（荜茇、诃子、山楂)三味散中胡椒碱的含量测定的方法。方法：采用高效液相色谱法测定,色谱柱为Kromasil(C18,5um,250mm×4.6mm)色谱柱，流动相为甲醇水(77:23)，检测波长为343nm。结果：胡椒碱在进样量6.96ug～1.99ug范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9999,平均回收率为102.9%,RSD为1.4%。结论：HPLC法简单准确,精密度高,分离度良好,可用于荜茇三味散

2、的质量控制。【关键词】荜茇胡椒碱含量测定高效液相色谱法　　AbstractObjective:Todeterminethecontentofpiperineinthethelongpepper3poinedbyRPHPLCasil(C18,5um,250mm×4.6mm)columnatroomtemperature.ThemobilephaseethanolL·min-1andtheinjectingvolume.Results:Thelinearrangeethodissimple,acc

3、urate,andcanbeusedforthequalitycontroloflongpepper3poination;HPLC　　本品为蒙药荜茇、诃子和山楂三味药材组成的散剂,是一个蒙医验方，此方具有降血脂的作用且临床应用效果好〔1〕。方中荜茇具有温中散寒、下气止痛之功效。荜茇的主要成分为胡椒碱,但蒙药荜茇三味散中胡椒碱的含量测定未见报道。为做进一步的研究和开发，故参考《中国药典》2005版第一部荜茇中胡椒碱的含量测定方法建立了荜茇三味散中胡椒碱的反相高效液相色谱测定法。结果表明,此法操作简便、

4、灵敏度高、重现性好,为有效控制产品质量提供依据。　　1仪器与试药　　1.1仪器依利特P230型高效液相色谱仪（大连依利特科学仪器有限公司）包括：UV230+紫外可见检测器，P230高压恒流泵，EC2000色谱工作站；AL204电子天平；溶剂过滤器；AS3120型超声振荡仪(220V、120asil(C18,5um,250mm×460mm)色谱柱;流动相:甲醇水(V:V=77:23);流速:1.0ml/min；进样量：20ul;检测波长：343nm;柱温：室温。　　2.2测定波长的选择参考药典

5、(中国药典2005版一部)荜茇中胡椒碱HPLC法含量测定检测波长在343nm处有最大吸收，故将测定波长确定为343nm〔2〕。　　2.3流动相的选择参考中国药典2005版一部的色谱条件，以甲醇水(77:23)为流动相，结果胡椒碱与其它组分能有效分离，故选择流动相甲醇水（77：23）为流动相。　　2.4对照品溶液制备精密称取胡椒碱对照品适量，置50ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀，制成每1ml含0.4432mg胡椒碱的溶液作为对照品溶液。　　2.5供试品溶液的制备称取荜茇、山楂、诃子粉末各3g(捣

6、碎,过120目筛),混合均匀后,精密称取荜茇三味散粉末1g,置于50ml量瓶中,加入甲醇适量,密塞,超声处理10分钟,放冷,用甲醇补液至刻度,摇匀放置片刻，取上清液用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液作为供试品溶液。　　2.6阴性对照试验按处方(不含荜茇药材)及制备工艺,制备空白样品,称取山楂、诃子粉末各3g(经捣碎,过120目筛),混合均匀后,称取混合粉末1g,精密称定,置50ml量瓶中,加入甲醇适量,密塞,超声处理10分钟,放冷,用甲醇补液至刻度,摇匀放置片刻，取上清液用微孔滤膜（0.45μm

7、）滤过，取续滤液作为空白溶液，进样20ul,记录色谱图,结果表明阴性样品溶液在胡椒碱出峰处没有干扰峰出现。见图1～3。　　2.7标准曲线的绘制将胡椒碱对照品溶液(0.4432mg/ml)依次精密吸取8ml,7ml,6ml,3ml,2ml分别置于5个10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度配制成浓度依次为0.35mg/ml,0.3mg/ml,0.25mg/ml,0.15mg/ml,0.1mg/ml等5份溶液，分别取上清液用微孔滤膜（0.45μm）滤过，各取样20ul,注入液相色谱仪,记录色谱峰面积(以峰面积为纵

8、坐标,以对照品浓度为横坐标,绘制标准曲线)计算回归方程Y(c)=〔9.8742e-006〕A+〔-8.061457e-003〕，r=0.9999，结果表明胡椒碱进样量在6.96ug～1.99ug范围内时与峰面积呈良好的线性关系。　　2.8精密度试验精密吸取上述供试品溶液用微孔滤膜（0.45μm）过滤,取样20ul，注入液相色谱仪，测定峰面积,连续进样5次,实验结果表明样品的精密度良好，见表1。　　2.9稳定性试验取同一样品的溶液分别于0，1，2，4，6，