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1、高效液相色谱法测定荜茇止痛酊中胡椒碱的含量【摘要】目的建立荜茇止痛酊中胡椒碱的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,C18色谱柱,四氢呋喃-甲醇-水(V∶V∶V=30∶30∶50)为流动相,流速为1.0mL/min,柱温为室温,检测波长为343nm,进样10μL,以外标法计算含量。结果胡椒碱在8.3~41.5mg/L内峰面积与对照品质量浓度呈良好线性关系,其回归方程为:A=3413186ρ-7467.7,r=0.9998;其平均回收率为99.7%,RSD=1.8%(n=6)。结论该方法简便,重复性好,空白无
2、干扰,可有效地控制荜茇止痛酊制剂的质量。【关键词】荜茇止痛酊;胡椒碱;高效液相色谱法Abstract:ObjectiveToestablishthemethodofcontentdeterminationofPiperineinBibaZhitongTincture.MethodsHPLCiningthecontentofpiperineinBibaZhitongTincture.C18chromatographiccolumnntemperaturebeingtheroomtemperature.Them
3、obilephaseethanol-L/min.Thedetection,andthesamplingvolumeethodg/L)shoassconcentrationofcontrolgroup.Itsregressionequationethodissimple,convenient,goodreproducibilityandnon-interference,andcaneffectivelycontrolthequalityofthepreparation.Keym×250mm,10μm),大连依
4、科特科学仪器有限公司;流动相:四氢呋喃-甲醇-水(V∶V∶V=30∶30∶50);流速:1.0mL/min;检测波长:343nm;柱温:室温;分离度:R>1.5;理论板数按胡椒碱峰计算应大于1500。 2.2检测波长的选择对胡椒碱的乙醇溶液进行紫外区扫描,结果胡椒碱在343nm处有最大吸收,故选用343nm作为检测波长。 2.3流动相的选择曾试验4种流动相:①甲醇-水(77∶23);②乙腈-水(70∶30);③乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液(70∶30),用磷酸调节pH为3.5、3.1;④
5、四氢呋喃-甲醇-水(30∶30∶50),其中④使胡椒碱峰与杂质峰分离效果好,能基线分离。 2.4溶液的制备对照品溶液的制备:精密称取胡椒碱对照品10mg,置50mL棕色量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀。精密量取5mL,置50mL棕色量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,即得(每1mL中含胡椒碱20μg)。 供试品溶液的制备:精密量取荜茇止痛酊1mL,置25mL棕色量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,摇匀,于冰箱中冷藏1.5h,取出,放置至室温,滤过,取续滤液5mL,置25mL棕色量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,即得。
6、 阴性对照液的制备:按处方中药味的比例自配不含荜茇的群药,按其工艺制成阴性制剂,再按供试品溶液制备方法制成空白溶液,即得。 2.5阴性液干扰试验 精密吸取供试品溶液、阴性液和对照品溶液各10μL注入色谱仪中,由色谱图可知,在与对照品色谱峰保留时间相应的位置上,供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰出现;而阴性液在此峰位无吸收,对本品中胡椒碱的含量测定无干扰,色谱图见图1。 2.6线性关系的考察 精密吸取胡椒碱对照品(10.38mg→50mL)1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL,分别置25mL棕
7、色量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,分别精密吸取10μL,注入高效液相色谱仪,记录峰面积。以对照品的含量对峰面积值作图,得到一个通过原点的直线,并绘制标准曲线。结果表明,胡椒碱在8.3~41.5mg/L范围内峰面积与对照品质量浓度呈良好线性关系,其回归方程为:A=3413186ρ-7467.7,r=0.9998。 2.7精密度试验精密吸取同一供试品溶液(批号041212),重复进样5次,求得RSD=0.93%。 2.8稳定性试验精密吸取同一供试品溶液(批号041212),分别于配制后0、2、4、8、16、
8、24h测定色谱峰面积,计算RSD为1.2%,结果表明,其在24h内基本稳定。 2.9回收率试验精密吸取已知含量的同一批号(批号041212)样品0.5mL,分别精密加入胡椒碱对照品乙醇溶液,依法测定,结果平均回收率为99.97%,RSD=1.8%(n=6)。见表1。表1加样回收率试验结果(略) 2.10样品中胡椒碱含量测定 取3批荜茇止痛酊样品,照“2.4”项测定,结果见表2。表2样品含量测定结果(略)