60coγ射线照射对肺泡ii型细胞和肺泡隔间质细胞的生物效应

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1、60Coγ射线照射对肺泡II型细胞和肺泡隔间质细胞的生物效应：刁瑞英,宋良文,王少霞,李明【摘要】　　目的:探讨60Coγ射线照射对肺泡II型细胞和肺泡隔间质细胞的生物效应。方法:原代分离肺内II型上皮细胞(ATⅡ)和间质细胞包括巨噬细胞和成纤维细胞,分别进行0、3、5、7Gy的γ射线照射,用细胞核嗜银染色观察照射对ATⅡ增殖的影响;用酶谱分析检测照射后ATⅡ和间质细胞培养上清中基质金属蛋白酶2、9（MMP2,9）的活性;用ELISA检测间质细胞培养上清中TGFβ1和IV型胶原含量。结果:ATⅡ

2、的核仁数量随照射剂量增加而增多,其中7Gy组最高;ATII培养上清中MMP2、9活性随照射剂量增加呈先增高后降低趋势,间质细胞上清中MMP2、9活性和TGFβ1水平逐渐升高,IV型胶原分泌水平呈先降低后升高趋势。结论:放射性肺损伤早期,ATⅡ、巨噬细胞和成纤维细胞均参与肺组织无效性重建过程,与晚期肺纤维化启动有一定的内在联系。【关键词】肺泡II型上皮细胞间质细胞MMPsTGFβ1IV型胶原　　[Abstract]AIM:Toexplorethebiologicaleffectof60Coγrayon

3、alveolartypeⅡcellsandinterstitialcellsofalveoliarseptum.METHODS:AlveolartypeⅡcells（ATⅡ）andinterstitialcellsincludinginterstitialmacrophagesandfibroblastsATⅡandinterstitialcellsafterirradiationinedbyzymography.ThelevelsofTGFβ1andcollagentypeIVinsupernatantf

4、rominterstitialcellsafterirradiationeasuredbyELISA.RESULTS:ThenucleolusnumberofATⅡATⅡafterirradiationincreasedatfirstandthendecreasedgradually.TheactivityofMMP2,9andthecontentofTGFβ1ininterstitialcellsincreasedstepbystep,butcollagentypeIVdecreasedatfirst

5、andthenincreased.CONCLUSION:ATⅡ,macrophagesandfibroblastsareallinvolvedinpulmonaryinvalidremodelingcourseinearlyradiationpulmonaryinjury,onaryfibrosisinlateperiod.　　[Keyetalloproteinase2,9,MMP2,9)是IV型胶原特异性降解酶。多种细胞参与了肺损伤重建过程,其中肺泡II型细胞和肺泡隔间质细胞（包括巨噬细胞,alveo

6、larmacrophages,AM;成纤维细胞,fibroblast,Fb）在肺损伤重建和纤维化发生中起重要作用。本研究拟原代分离上述细胞,探讨60Coγ射线对肺内细胞的生物学效应以及在早期肺损伤重建中的作用,揭示放射性肺损伤与肺纤维化之间的内在联系。　　1材料和方法　　1.1材料I1640培养基、DNase、大鼠IgG、TritonX100购于Sigma公司;小鼠抗人Ⅳ型胶原单克隆抗体(mAb)购于北京中杉金桥生物科技有限公司;兔抗大鼠TGFβ1多克隆抗体购于博士德公司。　　1.2方法　　1.2.1ATⅡ

7、和间质细胞（AM和Fb）原代分离参照Dobbs等[3]的方法,2.5g/L胰蛋白酶消化和剪碎肺组织,将细胞悬液加入大鼠IgG包被的培养瓶,37℃孵育3h,贴壁细胞为巨噬细胞和Fb混合体,将漂浮细胞离心8min获得ATⅡ。锇酸染色鉴定ATⅡ[4]。　　1.2.2细胞处理将接种ATⅡ的培养瓶随机分为0、3、5、7Gy4组,每组3瓶,分别进行γ射线照射,继续培养48h后收集上清,4℃3000r/min离心10min,同时制备细胞爬片。间质细胞的处理同上。　　1.2.3照射后ATⅡ的增殖分析（嗜银蛋白染色）爬片入

8、水,将染液（20g/L明胶/500g/LAgNO3为1/2）滴于其上1h,封片后图像分析,在400倍下每组取10个视野,测定每个视野的颗粒个数及颗粒面积,求出平均吸光度（A）值。　　1.2.4培养上清MMP2、9活性检测（明胶酶谱）参照文献[5],将ATⅡ和间质细胞上清进行SDSPAGE电泳、洗脱、漂洗、孵育、染色及脱色,成像分析条带面积和灰度;MMP2、9活