aspcr检测hiv-1微量耐药突变方法的建立和初步应用

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1、中国人民解放军军事医学科学院硕士学位论文ASPCR检测HIV--1微量耐药突变方法的建立和初步应用姓名：郭东星中请学位级别：硕士专业：微生物学指导教师：李敬云20100610情况，对抗病毒治疗方案的制定fl•奋很好的指导作川。检测劣势耐药毐株可以更好地了解耐药性产生的机理并及时地指好临床抗病毒治疗，尽可能延缓病人耐药轉材M。州.A柿NSO澹A直鹄3隽蕉硕即A忻盖碰，、将其连接到喊体，进行定点诱变并转化测序，得到痫毐与野生型痫毐根裾战fi按比例混合，捉取混合痫毐的砌、进行一步法逆转确性和灵敏度。主要结果如卜：QQKQC的炅敏度吋达卯％和G%。CiiR《舅G宵梏$峁

2、5允荆诚W检测6螺GG吸鸵34坏鉑卯的灵敏度可CGG舛R壤G肜砺郾壤＜；唎辛己玫囊恢滦浴R虼耍铖CC方法的前期流稈＜?方法在检测G簦＜?微量耐药突变中的应用人的系列样本，绘制了相应的耐药位点的受化曲线，监测其耐药突受殳化的情况，较。主耍结果如下：'k、M分存种的比例低于P%或髙于P%,其中一半以卜.耐药突变占病毒准种的比例低于队。卵Wt9鍋3沾蛐湍鸵6觳夥椒厂啾龋城沾检测微g耐药突变的能力显'k.wm；mm%.mmw綱的忠名•屮，V%以上的沾鉍沾/记沱V槐涠局晡Ai磕鸵v槐;沾痫毐枷沾局小t诓《驹亓饵喽越系沾沾6666S鹿66S666Ssgggg6666666糞

3、666,666666666SI6666666666SI费666S6.66,06s>6薛6666箱66S6666666666S6666截S6666666666666盞6666镞6.6瑯巨666666霧6g666F6666娶6666666666666智【66骓•666華66666666舳印.a©aanLaaaaaaaii籣。aaaaaaaddddddd3鰌aaaaaaa…璐aALCCCcccCCCCCcccCCCcccc括谢c谢ccccSRc谢ccccccccC%9ccCCCCGGG淛：CCCCCCC骼cccc砸cCCcc把ccc舔ccccc锄cCCCCCCCCCC

4、CccCCCcccccC錦GfGCG锄Gc路—CCCCCccccccc卜澌GCC鬭Cc.c%cccc欄…CCCCCcCCaRccc胍ccccccccc/c桑甅c農cccccctllilccccCr'ifLCCCCCC，CCCCccccccc斷ccccccccc购cc辍0cccccccccc版cccccCCCC粢经cKc觚cccccC繳ccccccccco它CCCC、啪cccccccccccc骸h闯鷇cciJi英文缩略词表测方法检出水平之下。这些种群迅然很小，但在耐药的发展过程中可能发挥着巫-、劣势耐药突变病诲株的米源±是2耐药病毒。特别是22222亲畛＜2牟沸2

5、2耐药基因突变形式，人突变株在痫毒种群屮的比例及分布可以为制记理想的临床治疗方案捉供重要依越米越多的证裾表明感染荞体内存fr:的劣势耐药株对治疗效果有显著的影响，可能足因为劣势耐药毒株的存迕降低了产生耐药的遗传屏障。感染耐药毐株的痫人，开始治疗后抑制病毒复制所需的时间更长，而到治疗失败的时间更短。使用更敏感的方法检测耐药痫毒可发现更多的常规基因型和农型方法检测不到的劣势耐药病毐。与整介酶抑制剂222孕22和222伊222驼2喙72222蛑衛突变与融合抑制剂222222耐药相关，能够促进222賺2巧的联合抑制受体结介或提髙rn滕n嗜性。i'i昀耐药相关突变位点核苷

6、类逆转录酶抑制剂I黯I类抗病谛药物是通过和逆转录酶的天然底Ii’槐浒i’i‘街帧if浚阂恢钟険11突变有关itrnn、n断口称为弘e。ni雳常发屮回复突变，在无药物选择压力时，增加n的复rn亲畛＜1胭it耐药突变。在体外试验中，n诃引起n对n投髑rnrniTii埏11叨饶鸵11缘卮锱敌rrnic，n株；当失败的II储疗方案中含n保i’AiTf是最先出现的耐药突变。非核苷类逆转诚酶抑制剂it源n是通过与n逆转泌酶相关区域结合，改变酶活性，进而抑制n木酆稀ni/i［埤n玀，ni疣代药突变，这些突变均nry••致n对n母叨饶鸵s简煌）［潭鹊市訣耐药。研究证明，Inf梢

7、允筇if訣I的耐药程度增加町捉n可以f碩1［耐药突变，且这I帜蛇a槐渚Hf餒iI圆沸fW耐药di。I】。在含雌n牧s现瘟浦覷n足最常见的m基因区的耐药突变。主要突变仅侖儿种。次要突变的出现与蛋白酶的交义耐药侖关，原因可能与抗病三、常规耐药检测方法行测序。表型分析处将3舷3产物*隆到前病毐背架中，包装病毐并检测相应定位点突变的、有确定的农型敏感性数据的序列进行比对，从而预测痫毐对药物的敏感性。抗病甫治疗失败病人体内的33劣势耐药突变株，增加了病人体闪的耐药压力,但采用常规的基因型方法又无法对其进行检测。高灵敏度的微跫耐药检测方法的应川表明，在抗病毒治疗失败的病人中

8、，耐药对抗病毒治疗失败的