缺失突变方法的建立及初步应用.pdf

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1、中国卫生检验杂志2014年3月第24卷第5期ChinJHealthLabTec，Mar2014，Vol24，No5·719··分子诊断与基因检测·高分辨熔解曲线技术检测HLA—G14bp插入／缺失突变方法的建立及初步应用陈晓晴，余玲玲，王慧燕，田可港，郑晓群温州医科大学附属第二医院检验科，浙江温州325027摘要：目的建立高分辨率熔解(HRM)技术检测人类白细胞抗原G(HLA—G)14bp插人／缺失突变的方法，并初步探讨其临床应用价值。方法对HRM进行方法学评价。对100例Ev71感染重症手足口病(HFMD)患儿、80例EBV感染传染性单核细胞增多症(IM)患儿和100例对照组进行HLA—

2、G14bp插．K／缺失突变的检测；用聚合酶链反应结合聚丙烯酰胺凝胶电泳(PCR—PAGE)法和产物测序法验证HRM分型。结果不同基因型HRM检测的批内、批间熔解温度(Tm)值的变异系数(c)均<0．1％；HRM与PAGE及直接测序所得基因型相符。100份EV71感染HFMD患儿DNA样本经检测，10份为14bp+／+纯合子基因型，42份为14bp+／一杂合子基因型，48份为14bp一／一纯合子基因型，与对照组比较差别有统计学意义(=6．181，P<0．05)，80份EBV感染IM患儿DNA样本与对照组比较差别亦有统计学意义(=8．531，P<0．05)。结论本研究建立的HRM技术可用于HL

3、A—G14bp插A,／缺失基因突变的检测。关键词：高分辨熔解曲线技术；人类白细胞抗原G；基因突变；EV71病毒；Epstein—Barr病毒中图分类号：Q754文献标识码：A文章编号：1004—8685(2014)05～0719—05Establishmentandapplicationofhigh--resolutionmeltingcurveanalysisindetection0fHLA—G14bpinsertion／deletionCHENXiao—qing，YULing～ling，WANGHui—yan，TIANKe—gang，ZHENGXiao—qunTheSecondAfil

4、iatedHospitalofWenzhouMedicalUniversity，Wenzhou325027，ChinaAbstract：ObjectiveToestablishamethodfordetectionofgenemutationsinHLA—G14bpinsertion／deletionbyhigh—res·olutionmehing(HRM)andexplorethepreliminaryclinicalapplication．MethodsAmethodfordetectionofHLA—G14bpinsertion／deletionbasedonHRMwasevalua

5、tedbymetl1odology．OnehundredsevereHFMDchildreninfectedwithEV71(EV71group)，80infectiousmononucleosis(IM)childreninfectedbyEBV(EBVgroup)and100controls(controlgroup)werein-volvedtodetectHLA—G14bpinsertion／deletionbyPCR—HRM．TheHRMresultswerefurtherconfirmedbyPCR—PAGEandsequencing．ResultsThecoeficients

6、ofvariationofwithin—mRandbetween—runTmvalueswerealllessthan0．1％inHLA—GofdifferentgenotypesbyHRM，showingcoincidentgenotypeswithPAGEanddirectDNAsequencing．Thereweretencasesof14bp+／+homozygousgenotype．forty—twocasesof14bp+／一heterozygousgenotypesandforty—eightcasesof14bp一／一homozygousgenotypeintheEV71g

7、roup，andtherewassignificantstatisticaldifferenceinthefrequenciesoftheHL一G14bpgenotypesbetweentheEV71groupandcontrolgroup(=6．181，P<0．05)．AndthesignificantstatisticaldiferencewasalsoobservedbetweentheEBVgroupandcon