检测肌糖蛋白C夹心ELISA方法的建立及初步应用.pdf

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1、694ISSN1007—8738细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmuno1)2011．27(6·论著·文章编号：1007—8738(2011)06—0694—03检测肌糖蛋白C夹心ELISA方法的建立及初步应用王育才，张殿忠，何立宏，丁勇，单乐群(第四军医大学附属唐都医院骨科，陕西西安710038)Establishmentandprimaryapplication者血清中肌糖蛋白C浓度明显高于正常人。结论：成功建立检测肌糖蛋白C的夹心ELISA方法，并利用其检测到肌糖蛋ofsandwichELISAmethodtodetectte．白C在骨肉瘤患者

2、中的浓度异于正常人。nascin．C[关键词]肌糖蛋白C；夹心ELISA；单克隆抗体；骨肉瘤[中图分类号]R392．11[文献标识码]BWANGYu—cai，ZHANGDian-zhong，HELi·hong，DINGSHAN12一qun，肌糖蛋白c(tenascin—C，TN—C)是高分子量的细DepartmentofOrthopaedics，TangduHospital，FourthMilitary胞外基质重要成分，表达为多种分子量的可变体，MedicalUniversity，Xi’an710038，ChinaTN—C最早被发现富集表达于胶质瘤基质中，也被当作肌腱

3、抗原。发现其能调节细胞与纤连素之间的黏『Abstract]A蹦：T0establishasandwichmethodtodetecttenascin-ConthebasisofpreparationofmonoclonaI附，被分类为抗黏附和黏附调节蛋白。TN—C在发育antibodies(mAbs)againsttenascin-C(TN-C)．MEm-阶段和成人中都能调节表达。组织学中观察到TN—CoDs：111eascitesofthreestainsofmAbs(No．1A8，3H7在器官形成中短暂表达，而在已经完全发育成熟的and41：)6)wereprep

4、aredandpurified．ThemAbswerecon-器官中则丰度降低或者不表达。但是在一些病理情jugatedwithHRPandpaired，respectively．Therecombi-况下如感染，炎症和肿瘤情况下表达升高¨。nantTN-CwastakenasstandardtoanalyzetheoptimalTN—C在肿瘤发生发展以及转移中起重要作用，combinationbetweenmAbs．TheseraTN—Cconcentrations但其在骨肉瘤发病过程中的表达调变和作用尚不明ofpatientswithosteosarcomaand

5、thenormalpersonswere确。我们曾经制备了3株抗TN—C的单克隆抗体evaluatedwiththesandwichELISAmethod．RESULI's：A-(mAb)，并进行了初步鉴定J。在本研究中我们利mongthesemAbs，themostsensitivitywasobtainedwhen用此3株抗体建立了检测TN—C的夹心ELISA方法，combinedthecoated1A8withHRP-4D6．TheseraTN-Cconcentrationsofpatientswithosteosarcomaweresignifi-并用于检测血

6、清中的TN—C分布。cantlyhigherthanthenormalcontrols．CoNCLUS10N：ThesandwichELlSAmethodtodetectTN-Cwasestablished1材料和方法successfully．TheseraTN．Cconcentrationsofpatientswith1．1材料Pristane、RPMI1640、辣根过氧化物酶(HRP)、osteosarcomaandthenormaIpersonswerefounddistinctABTS购自美国Sigma公司。小牛血清购自杭州四季青生物材withthesandw

7、ichmethod．料有限公司。QSepharoseFastFlow柱购自美国Pharmacia公[Keywords]tenascin-C；sandwichELISA；monoclonalan-司。杂交瘤细胞株(克隆号分别为：1A8、3H7和4o6)由我科tibody；osteosarcoma室制备。6周龄雌性BALB／c小鼠购自四医大动物中心。重组TN-C蛋白由我室制备并纯化。全自动酶标仪为美国Bio—[摘要]目的：以已经制备的抗肌糖蛋白C(TN—C)的单克Rad公司产品。健康人外周血由唐都医院输血科提供。骨肉隆抗体(—b)为基础，建立能定量检测肌