st细胞蛋白定量elisa检测方法的建立及初步应用

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1、Ｓ８分类号：密级；公开馨《典Ａ乂穿硕±学位论文题目：ＳＴ细胞蛋白定量ＥＬＩＳＡ检测方法的建立及初步应用姓名：暴艳敏学号：Ｙ１２２１４０４７６学院：生命科学与工程学院专业：预防兽医学硏究方向：动物细胞工程疫苗导师：李佐教授二〇—五年五月西化民族大當生命科学与工括学院２０１２级预防兽民学柿＋研巧生巧业论立Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａ凸ｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆａｎＥＬＩＳ乂Ａｓｓａｙ化ｒＤｅｔｅ

2、ｒｍｉｎｉｎＨｏｓｔＣｅｌｌＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＳｗｉｎｅＴｅｓｔｉｓｇＡｔｈｅｓｉｓＳｕｂｍｉｔｅｄｆｏｒｔｈｅＤｅｇｒｅｅｏｆＭａｓ１；ｅｒＣａｎｄｉｄａ化；ＢａｏＹａｎｍｉｎＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＬｉＺｈｕｏＮｏｒｔｈｗｅｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｆｏｒＮａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓＬａｎｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ巧化民族大堂年命勒堂与工巧當院２０１２级预防兽民学硕＋研巧生巧业论女关于学位论文使用授权的声明本人在导师指导下所

3、完成的论文及相关的作品，知识产权归属西北民族大。学本人完全了解西北民族大学有关保存、使用学位论文的规定，同意学校保存或向国家有关部口或机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权西北民族大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据。库进行检索，可采用任何复制手段保存和汇编本学位论文本人离校后发表、一使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，第署名单位仍然为西北民族大学。保密论文在解密后应遵守此规定。Ｗ论文作者签＾导师签名日期：Ｗ化＿麵

4、Ｉ面北民族大学生命科学与工巧堂院２０１２级预防兽民学佩＋研巧牛單＃论古原创性声明：本人郑重声明本人所呈交的学位论文，是在导师的指导下独立进行研究。、数据所取得的成果学位论文中凡引用他人已经发表或未发表的成果、观点，等，均己明确注明出处。除文中己经注明引用的内容外不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究成果做出重要贡献的个人。和集体，均已在文中明确方式标明本声明的法律责任由本人承担。：訓曼、与、２＾论文作者签名：義私敏＿日期ＩＩ面

5、化民族大学生命掛韋与工程学院２０１２级巧防普民学柿＋研巧生述＃论古摘要猪睾丸细胞（ＳｗｉｎｅＴｅｓｔｉｓ，ＳＴ）细胞系于１９６０年由ＭｅＣｌｕｒｋｉｎＡＷ等建立，属于成纤维细胞系，体外培养呈贴壁状态。该细胞系用于猪细小病毒ＰＰＶ、伪狂犬病毒、ＰＲＶ、猪痘（）（）病毒（ＣＳＦＶ）、猪传染性胃肠炎病毒（ＴＧＥＶ）等的繁殖和猪攝疫苗、猪细小病毒疫苗的制备，一。是病毒繁殖生产的重要细胞系之为了保证疫苗或生物制品的安全有效，对多种宿主细胞蛋白残留量进行了限定。因此，本研究对猪睾丸宿

6、主细胞蛋白残留特异性检测方法进行了初步的研究。利用本实验室保存的猪睾丸细胞制备了细胞抗原，采用低剂量长程免疫制备多克隆抗血清。用间接化ＩＳＡ和ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法对制备的抗血清效价和特异性进行了测定，结果表明，抗体效价大于１：１００００；琼脂双扩散效价均大于１：４；制备的多克隆抗体具有良好的特异性，与ＤＭＥＭ、ＭＥＭ、新生牛血清、胎牛血清、马血清均没有交叉反应。利用纯化的抗体，建立了猪睾丸宿主细胞蛋白定量检测的间接ＥＬＩＳＡ方法。所建立的方法具有良好的重复性、特异性

7、和灵敏度，可Ｗ检测疫苗制品中大于２５ｎｇ／ｍＬ的残留蛋白，标准曲线的线性范围为－ｍＬ２５４（Ｋ）ｎｇ／。对建立的间接ＥＬＩＳＡ定量检测方法进行了初步应用，对市售的猪痘疫苗中猪睾丸细胞宿主蛋白残留量进行了检测。ＥＬＩＳＡ，本研究建＿＾了猪睾丸细胞蛋白残留量的间接定量检测方法为生物制品中宿主细胞蛋白残留的控制提供了可靠的检测手段，为生物制品的安全有效提供了有力的保障。：猪睾丸细胞ＳＡ关键词，化Ｉ，蛋白残留，多克隆抗体ＩＩＩ西化民族大学生命釉學与工程学院２０１２级巧防兽戻学砲＋研

8、巧牛造＃论女ＡｂｓｔｒａｃｔＳｗｉｎｅＴｅｓｔｉｓ（ＳＴ）ｃｅｌｌｌｉｎｅｂｅｌｏｎｇｓ１：〇化ｅｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｃｅｌｌｌｉｎｅ，ｉｔｗａｓ巧ｒｓｔｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙＭｅＣｌｕｒｋｉｎＡＷｉｎ１９６０，ａｎｄ如Ｖ妃巧ｃｕｌｔＵＫｄｐｒｅｓｅｎｔｅｄａｄｈｅｒｅｎｔｓｔａｔｅ．Ｉｔｃａｎｂｅｕｓｅｄｆｏｒ优ｅｒｏａｔｏｎａｎｄｉｉｉｉｌａｉｓｏｌａｔｉｏ打ｏｆ