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1、高效液相色谱法测定广西粉葛中葛根素的含量:杨立芳,李小燕,罗伟强,潘洪平,邓光辉,韦冬萍【关键词】广西粉葛;,,葛根素;,,高效液相色谱法 摘要:目的采用HPLC法测定广西粉葛中葛根素的含量。方法色谱柱PhenomenexGeminiC18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈(A)-0.4%磷酸水溶液(B),采用梯度洗脱;流速:1.0ml/min;检测波长:250nm;柱温:30℃。结果葛根素在800~2400ng范围内峰面积与进样量呈良好的线性关系。回归方程为A=7.682×104C+5.885×104,r=0.
2、9993(n=5)。其平均回收率为99.49%,RSD为0.75%(n=5)。结论该方法简便易行,结果准确,可作为广西粉葛药材质量控制的有效方法。 关键词:广西粉葛;葛根素;高效液相色谱法 DeterminationofPuerarininContentinGuangxiRadixpuerariaethomsoniibyHPLC Abstract:ObjectiveTodeterminethecontentofpuerarinfromGuangxiRadixpuerariaethomsoniibyHPLC.MethodsTh
3、eisolationenexgeminiC18column(250rmm×4.6mm,5μm),themobilephaseconsistedofacetonitnle(A)-0.4%phosphoricand(B)inagradientmodel,theflol/min,thedetectionandthecolumntemporatureethodissimple,rapid,accurateandreliable.ItcanbeusedforqualitycontrolofGuangxiRadixpuerariaethoms
4、onii. Keysonii;Puerarin;HPLC 粉葛为豆科植物甘葛藤(PuerariathomsoniiBenth)的干燥根。收载于《中国药典》各版[1]。主含异黄酮成分葛根素(Puerarin)、葛根素木糖苷(Puerarin―xyloside)、大豆黄酮(Daidzein)、大豆黄酮苷(Daidzein)及多量淀粉等[2],具有解肌退热、生津、透疹、生阳止泻之功效[3]。葛根素是粉葛药材中的主要活性成分之一,具有扩张冠状动脉,降低血压,减少心肌耗氧量;抗心率失常;降血糖,降血脂;抗动脉硬化,改善微循环;抗肿瘤等多
5、种药理作用[4]。为此,粉葛越来越受到人们的重视。本文采用适宜的提取方法,通过HPLC法对广西不同产地粉葛中葛根素进行含量测定,可较全面地评价广西粉葛药材质量,为广西粉葛药材的开发和应用提供了实验基础。 1仪器与试药 美国PerkinElmerSeries200液相色谱仪;紫外检测器;葛根素对照品(中国药品生物制品鉴定所批号:110752-2004110);乙腈为色谱纯;水为超纯水。其余试剂均为分析纯。实验所用粉葛药材(产地:广西)经广西南宁食品药品检验所鉴定。 2方法与结果 2.1色谱条件色谱柱:PhenomenexGe
6、miniC18柱(250mm×4.6mm,5μm);检测波长:250nm;柱温:30℃;进样量:20μl;理论板数按葛根素计算不低于5000。流动相:乙腈(A)-0.4%磷酸水溶液(B),流速:1.0ml/min。采用梯度洗脱,程序:0~5minA/B(0:100);5~25minA/B(11:89);25~40minA/B(17:83);40~50minA/B(35:65);50~70minA/B(78:22)。 2.2对照品溶液的制备精密称取20mg葛根素对照品,用30%乙醇超声5min使溶解,定容至50ml容量瓶中摇匀,即
7、得(每毫升中含葛根素400μg)。 2.3供试品溶液的制备取粉葛药材粉末约1.0g(过2号筛),精密称定,精密加入30%乙醇溶液50ml,称定重量,用超声清洗器进行超声提取1h,再次称定重量,用30%乙醇溶液补足减失的重量,然后减压过滤,取出滤液,用0.45μm水系微孔滤膜过滤,得供试品溶液。 2.4系统适用性实验在“2.1”项色谱条件下,葛根素与相邻峰可达到基线分离,分离度大于4.0,理论塔板数以葛根素计算为5000,色谱图见图1。 2.5线性关系考查精密称取20mg葛根素对照品,用30%乙醇溶解(需超声5min),定容至
8、50ml容量瓶中制成贮备液。分别精确量取贮备液1.00,1.50,2.00,2.50,3.00ml定容至10ml,制成葛根素含量为40.00,60.00,80.00,100.0,120.0μg・ml-1的标准溶液,各进样20μl,记录