降钙素基因相关肽抑制白细胞介素

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1、降钙素基因相关肽抑制白细胞介素【关键词】破骨细胞关键词:降钙素基因相关肽;成骨细胞;破骨细胞;白细胞介素-1摘要:目的了解白细胞介素-1β（IL-1β）在破骨细胞性骨吸收中的刺激作用，并评价降钙素基因相关肽（CGRP）的拮抗效果.方法将新生大鼠破骨细胞和成骨细胞混合培养，接种于预置象牙片的培养板中.24h后培养液中分别加入IL-1β和不同浓度的CGRP.继续培养48h，然后取出象牙片，超声处理后行甲苯胺蓝染色，光镜下观察骨吸收陷窝数目并计算其总面积.结果IL-1β明显增加象牙片上吸收陷窝的数目（37.2±8.2v

2、s22.4±5.7）perslice（P<0.01）和面积（μm2，9761±2775vs4224±1381，P<0.01），而CGRP则能够显著抑制IL-1β的刺激作用（P<0.05或P<0.01），且抑制作用呈剂量依赖性（r1=-0.56，P<0.01;r2=-0.49，P<0.05）.结论CGRP可直接作用于破骨细胞并抑制其活化，并调节成骨细胞相关因子的释放而间接影响破骨细胞功能.　　KeythelongbonesofneediacontainingCGRPand/orI

3、L-1βberofresorptionlacunaeoneachsliceicroscopeandtheareaeasuredbyputerimaginganalysissystem.RESULTSIL-1βstimu-latedsignificantlyboneresorptionasshobers（37.2±8.2vs22.4±5.7perslice，P<0.01）andareasofresorptionlacunae（μm2，9761±2775vs4224±1381，P<0.01）onslice

4、s，butCGRPinhibitedtheeffectsmediatedbyIL-1βinadose-dependentmanner（r1=-0.56，P<0.01;r2=-0.49，P<0.05）.CONCLUSIONCGRPmayinhibitosteoclasticboneresorptionthroughadirectfunctiononosteoclaststoblocktheiractivation，andregulatethereleaseofcytokinesbyosteoblasts

5、thusaffectingindirect-lythefunctionofosteoclasts.　　　0引言　　破骨细胞是骨吸收过程的效应细胞，其生成、活化及其在骨吸收中的作用受细胞因子和细胞间相互作用所调节.IL-1是一种骨吸收刺激因子，可在多种骨吸收性疾病中异常地增高，其作用的方式是由成骨细胞或骨髓基质细胞介导，而非直接作用于破骨细胞.我们采用体外成骨细胞和破骨细胞联合培养的方法来观察IL-1对破骨细胞性骨吸收的刺激作用以及降钙素基因相关肽（CGRP）的拮抗效果.　　1材料和方法　　1.1材料大鼠降钙素基因

6、相关肽α（rCGRPα，Sig-ma产品），大鼠白细胞介素-1β（rIL-1β，Sigma产品），出生24h内的SD大鼠（同济医科大学实验动物中心提供），MEM培养基及胎牛血清（Gibco公司），HEP-ES、青霉素、链霉素及甲苯胺蓝（均为Merck公司），抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色试剂盒（中国医学科学院血液病研究所产品）;无菌象牙片（6mm×6mm大小，30μm厚）、盖玻片.实验分组为对照组、IL-1刺激组（rIL-1β浓度为10μg・L-1）和治疗组（rCGRP的终浓度为10-9，10-

7、8，10-7，10-6mol・L-1，其中各组均含rIL-1β10μg・L-1）.　　1.2方法　　1.2.1破骨细胞的培养取新生SD大鼠，拉颈处死，750mL・L-1乙醇浸泡5min，分离其股骨、肱骨和胫骨，清除骨表面软组织和骨骺，骨干部分放入盛有MEM培养液（含150mL・L-1胎牛血清、25mmol・L-1HEPES缓冲液、100kU・L-1青霉素、100kU・L-1链霉素、pH7.0～7.1）的玻璃平皿中，用

8、解剖刀纵剖后将骨质内表面轻轻刮入培养液，吸管反复冲打骨质碎片2min，静止30s后，收集上清，调整细胞浓度为1×109・L-1，再均匀接种于预置盖玻片和象牙片的6孔板中（此前已加MEM培养基预培养2h）.常规培养（37℃，50mL・L-1CO2、饱和湿度）30min后，用MEM培养液冲掉未贴壁细胞，更换培养液继续培养，8h后取出盖玻片，行破骨细