高效液相色谱法测定山楂叶中槲皮素的含量

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1、高效液相色谱法测定山楂叶中槲皮素的含量权迎春关丽萍郑光浩【关键词】高效液相色谱法摘要：目的建立山楂叶中高效液相色谱(HPLC)法的含量测定方法。方法采用HPLC对槲皮素进行定量测定；采用YMCpackODSA(4.6mm×250mm,5μm)，色谱柱，检测波长为370nm。结果色谱条件为流动相甲醇0.2%磷酸溶液(50∶50)；柱温25℃；流速0.8ml・min1，此法线性范围0.08～0.32μg，r=0.9992，方法的精密度RSD为1.04%(n=5)。平均回收率为96.75%，RSD=1.67%(n=5)。结论此方法操作简便、准确性好，可以作为山楂叶中槲皮素含量测定方法

2、。关键词：山楂叶；高效液相色谱法；槲皮素；含量测定Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCmethodforthedeterminationofquercetininhainedbyHPLC.YMCODSA(4.6mm×250mm,5μm)column.ResultsThemobilephaseconsistedofmethanol0.2%phosphaticacid(50∶50)l・min1andcolumntemperatureat25℃.ThemethodethodRSDethodappearedtobesimple,highlyaccura

3、te.Itcanbeusedfortheappeareddeterminationofquercetininhaination山楂叶为蔷薇科植物山里红CrataeguspinnatifidaBge.Var.majorN.E.Br.或山楂CrataeguspinnatifidaBge的干燥的叶，秋季果实成熟后采收。多产于我国北方，是一种常用天然药用植物，其野生资源非常丰富。近几年随着提取工艺、检测手段的提高，对于山楂叶的研究有了很大进展。研究表明，已经从山楂叶中分离出山楂素、槲皮素、山萘酚、芦丁、胡萝卜苷及二十九烷醇等成分〔1，2〕。其药理作用主要有对抗氧自由基的清除作用、降血压

4、、降血脂功能〔3，4〕等。槲皮素为山楂叶中一种黄酮类化合物，研究表明，槲皮素具有抗炎、抗自由基、抗氧化的药理活性〔5，6〕。本实验采用HPLC色谱法测定了山楂叶中槲皮素的含量，此方法准确、灵敏度高、重现性好。1仪器、试剂和药品SCL10Avp型高效液相色谱仪(日本岛津)；SPD10Avp型紫外可见检测器(日本岛津)；RE52C型旋转蒸发仪(上海青浦沪西仪器厂)；SHSB95型循环水式真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；TG328B型分析天平(上海精密科学仪器有限公司)；MP200型电子天平(上海良平仪器仪表公司)。甲醇(色谱纯)，槲皮素(对照品，中国药品生物制品检定所)。样品采自

5、吉林省延吉市市郊，由延边大学药学院刘永镇教授鉴定为真品。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱为YMCpackODSA(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱；流动相为甲醇0.2%磷酸溶液(50∶50)；柱温：25℃；流速：0.8ml・min1。2.2测定波长的选择取槲皮素对照品配制成一定浓度的甲醇溶液，在200～500nm波长范围内进行紫外光谱扫描，确定370nm做为测定波长。2.3标准曲线绘制2.3.1标准溶液的配制精密称取槲皮素对照品8.9mg，置于50ml量瓶中，加入甲醇溶解，定容于50ml，然后精密吸取1ml置于10ml容量瓶中定容，备用。2.3.2线性范围取上述槲皮素对照

6、品溶液，分别进样5.0，7.5，10.0，12.5，15.0，17.5μl，按色谱条件测定峰面积积分值，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准吸收曲线，得槲皮素(C)与峰面积(A)的关系，C=599370－1.628245A，相关系数r=0.9992。结果表明，槲皮素溶液浓度在0.08～0.32μg内，槲皮素峰面积(A)与浓度(C)之间呈良好的线性关系。HPLC色谱图见图1。图1HPLC色谱图2.4精密度实验精密吸取对照品供试液，按“2.1”项下条件，连续进样5次，10μl/次，测定峰面积积分值计算RSD值，结果RSD=1.04%，说明仪器和色谱条件均具有良好的精密度。2.5

7、重现性实验精密称取药品粉末0.5g共5份，按“2.8”项下样品溶液的制备操作，按“2.1”项下条件连续进样5次，每次20μl，测定峰面积计算得RSD=1.35%，结果显示，该方法具有较好的重现性。2.6稳定性实验在室温条件下，将样品按测定方法处理后，分别在0，0.5，1.0，1.5，2.0h每次进样20μl，测得峰面积计算RSD=0.84%（n=5）。结果表明，该溶液含量基本保持不变。2.7回收率实验精密称取样品0.5g共10份，其中5份按2.8项下测定样品本底含量，5份各加入槲皮素对照品溶