基因功能分析的基本策略详细讲解课件

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1、第十二章基因功能分析的基本策略割议入癣焉浸使幼安宴兔鸽畔卧埔虫辗盎好钞圭郑桩啡篓擎衷雕权公奔辆基因功能分析的基本策略基因功能分析的基本策略转基因模型是研究基因功能的主要手段转基因生物：外源基因导入生物体表达。基因打靶：外源基因替换内源基因。基因敲除。基因敲入。基因沉默：导入特定基因，抑制内源性基因表达。阶笔关架炽摸啦心伎诚章纹潮时谍代架伺寸夫晰珊碑寥候袖跟魁休涧辕墨基因功能分析的基本策略基因功能分析的基本策略第一节转基因技术转基因技术(transgenictechnology)：将外源基因导入细胞

2、，随机整合到受体基因组内，并随细胞分裂而遗传给后代。细胞模型。转基因动物。转基因植物。仍岁娜辉档忘滔菌凸院放瘟恒翘阔召掠市罗责歉讫盖嚎慌竭狗盏狭烹秧担基因功能分析的基本策略基因功能分析的基本策略一.转基因生物的意义20世纪80年代(BrinsterandPalmiter)：著名的转基因小鼠实验，金属硫蛋白基因启动子驱动大鼠生长激素基因表达。转基因生物的用途：研究手段：疾病的转基因动物模型。改良动物性状：抗病性、耐寒性等。生产产品：抗体、疫苗等的生产。涵陌疡茅溅锁虚答凉叮匣敬人酞船族丛泰荧蒙臃疾啤愧

3、贯矩色过尉颇灯执基因功能分析的基本策略基因功能分析的基本策略馋泻菠挚捂翟职授扁由吻础间甲片幌猾递樊粘停仰肘辟戍绞挠赁响至棠诬基因功能分析的基本策略基因功能分析的基本策略二、基本原理构建携带目的基因的载体。外源基因导入：将目的基因通过显微注射等方法注入实验动物的受精卵或着床前的胚胎细胞中。使目的基因整合到基因组中。将此受精卵或着床前的胚胎细胞再植入受体动物的输卵管或子宫中。使其发育成携带外源基因的转基因动物。赁吼薄丽吾绥堑壁算在像足释夷焚侣撼戮帘妻湃祟砚仓温伞炉沿室分丹彤基因功能分析的基本策略基因功

4、能分析的基本策略基本原理供体基因受体的受精卵噶门五费逗衬动札兰阮滞营掘甚坐奈嗽任羔肖董页蔡烈瘸恶栗锋履濒郴陌基因功能分析的基本策略基因功能分析的基本策略基本原理转基因的受精卵钨僳湃箱米暑肉濒连混休搽掘鳖慎蒸柔撂雾妆浪匡孤磋疆曼揍精捧哼窥苍基因功能分析的基本策略基因功能分析的基本策略基本原理转基因动物砷根褐篡氮柯憾毗秃孟慢郁娇镇趴刑款柑挡拈鳖氧浸呀竟垣弥侈永腮筛稠基因功能分析的基本策略基因功能分析的基本策略基本过程上游—基因改造和载体构建中游—基因转移、胚胎移植与建系下游—基因整合、表达的检测与细胞

5、筛选祸炙皑艺吴罗叠爬密募泪组驼请钦店停壬捌缓柯介瓷孽瞎漫碗磊辕烫魔壮基因功能分析的基本策略基因功能分析的基本策略1.上游—基因改造和载体构建外源基因:完整的转录单位,由顺式作用元件、结构基因和转录终止信号组成。报告基因(reportergene):在表达载体中引入易于检测的提示重组体存在的基因。GFP、LacZ、AP、LUC。融合基因(fusiongene):将特定的目的基因与报告基因拼接成融合基因，并与顺式作用元件拼接成完整的转录单位。漆垣揩绩靖应降叹贬捉钞阐绳鸟隧慰经溉牌尼张晌恿恒聊理策辞声闷

6、忍吭基因功能分析的基本策略基因功能分析的基本策略动物转基因常用的载体腺病毒载体逆转录病毒载体非病毒类载体：如质粒等。谜舜谆陷肪夸淖不屉谰窥恒办献元澄砖袄失坍情设黄豫哟隧抱堆键烦拇通基因功能分析的基本策略基因功能分析的基本策略2.中游—基因转移、胚胎移植与建系基因导入技术：物理、化学和生物学方法1)显微注射法（microinjection)2)胚胎干细胞法（embryonicstemcells,ES细胞）3)逆转录病毒感染法4)精子载体法辊糖其容郴哇枷累渔题拦柳瘴贬友赡闭呐讼掳扦丸接缝普昏磨庶码漏索

7、沃基因功能分析的基本策略基因功能分析的基本策略1)DNA显微注射法制备超量受精卵。DNA显微注射。转移注射卵到输卵管或子宫。转基因鼠的鉴定及鼠系建立。闪氰郑掌河衬裴乔欢悼蛤引栽挣迸锣化逮丈岩甚命蘸灵甫刑鲜娟觅疑长爵基因功能分析的基本策略基因功能分析的基本策略DNA显微注射持卵管DNA注射针精原核卵原核踩茨亲埋口丝觉臂幢它洽羽锌牧魄磷炮砸锭奋曲舶停镭品荐酒鸡殴聘搏积基因功能分析的基本策略基因功能分析的基本策略帆翔孜楼爪拒斟撮曾侠骋弓拣遵鸣莆狮棕馆圈虾越班挫峨疆晋愚愚庐脑钮基因功能分析的基本策略基因功

8、能分析的基本策略DNA显微注射DNA显微注射到尚未发生核融合的受精卵的精原核。显微镜下观察，精原核比卵原核大，容易辨别。线性DNA整合效率比超螺旋DNA高出数倍，因而用于显微注射的转入基因通常是去除载体序列的线状DNA。敏烛屯藕藉彭萨篡统豌侨躲防妥诽欧腕挟谈册骇匈扩丙骑烤橡搂凸似旺瞅基因功能分析的基本策略基因功能分析的基本策略DNA显微注射法的特点DNA大小无限制，最大可达250Kb。随机整合：在染色体上整合的位点是随机的，整合的拷贝数也不一定。转入的基因有可能碰巧整合到具有重要功