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《版纳微型猪近交系aqp3基因的克隆、序列分析与-中国实验动物学报》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、版纳微型猪近交系TDRP1基因克隆、鉴定及mRNA组织表达特性研究王配1,2,霍金龙1,2[基金项目]国家自然科学基金项目(No.31160439)[作者简介]王配(1987—),女,河南上蔡人,实验师,博士研究生,主要从事动物分子遗传学方面的研究。E-mail:peipei99999@126.com,Tel:15198779711。[通讯作者]霍金龙(1975—),男,山西五寨人,高级实验师,博士,主要从事动物分子生物学方面的研究。E-mail:jinlonghuo973@163.com,Tel:13708761403。,王淑燕1,2,潘伟荣
2、1,2,查星琴1,2,施晨1,曾养志1,2(1.云南农业大学云南省版纳微型猪近交系重点实验室昆明650201;2.云南农业大学动物科学技术学院昆明650201)【摘要】目的克隆版纳微型猪近交系(BMI)不育和可育公猪TDRP1基因,分析其序列及mRNA表达水平上的差异,预测其蛋白质功能,并检测该基因在可育公猪中的组织表达分布情况。方法以猪NM_001198925序列为模板,设计特异引物,采用RT-PCR方法结合测序获得TDRP1的cDNA序列并进行生物信息学分析;采用半定量PCR方法检测TDRP1在不育和可育公猪睾丸中的表达规律,分析该基因在可
3、育公猪17种组织中的表达特征。结果获得了BMITDRP1基因的编码区序列(GenBank登录号:KJ186786),生物信息学分析表明其编码186个氨基酸,蛋白质分子量(Mw)为20.49kD,等电点(pI)为5.86,无信号肽,有94.1%的概率位于细胞核,含有1个亮氨酸富集的核输出信号。不同物种的氨基酸序列比对表明猪TDRP1与人、恒河猴、小鼠和大鼠等哺乳动物的TDRP1相似性在73%~83.2%之间,其中与人、恒河猴的相似性较高。mRNA表达分析表明,TDRP1在BMI不育和可育公猪睾丸间表达水平无显著差异,在精囊腺和前列腺中高表达,在睾
4、丸和小脑中中度表达,在大脑和肾脏中低表达,在其余组织中不表达。结论成功克隆了BMITDRP1基因的全长编码区序列并发现了BMI特有的2个SNP位点;TDRP1基因在BMI不育和可育公猪间序列完全一致,睾丸mRNA表达水平无显著差异,多组织转录谱分析表明该基因存在明显的组织差异表达现象,在精囊腺和前列腺中有较高表达量,为深入研究TDRP1基因在精子发生方面的作用奠定了基础。【关键词】精子发生相关蛋白1;精子发生;版纳微型猪近交系;生物信息学;组织表达特性【中图分类号】【文献标识码】A【文章编号】Molecularcloning,sequencec
5、haracterizationandmRNAtissueexpressionanalysisofTDRP1genefromBannamini-piginbredline(BMI)WANGPei1,2,HUOJin-long1,2*,WANGShu-yan1,2,PANWei-rong1,2,ZHAXing-qin1,2,SHIChen1,ZENGYang-zhi1,2(1.KeyLaboratoryofBannaMini-pigInbredLineofYunnanProvince,YunnanAgriculturalUniversity,Kun
6、ming650201,China;2.FacultyofAnimalScienceandTechnology,YunnanAgriculturalUniversity,Kunming650201,China)【Abstract】ObjectiveTogetTDRP1geneofsterileandfertileboaroftheBannamini-piginbredline(BMI),predictitsfunctionbybioinformaticsmethod,anddetecttheexpressionpatternsintheferti
7、leboar.MethodsBasedontheNM_001198925sequence,wedesignedspecificprimersandamplifiedBMITDRP1usingRT-PCRmethodforsequencingandbioinformaticsanalysis.Meanwhile,theexpressionofTDRP1in17importanttissuesoffertileBMIboarandinthetestisofsterileandfertileBMIboarswasanalyzedbysemi-quan
8、titativeRT-PCR.ResultsTheresearch10obtained680bpcDNAsequence(GenBankaccessi