食管癌术后早期肠内营养并发乳糜胸19例报告

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1、食管癌术后早期肠内营养并发乳糜胸19例报告作者：廖爱军，苏琦，田锋，姚育红，曾斌　【摘要】目的探讨湖南衡阳地区白细胞介素1B基因多态性与胃癌的关系以及幽门螺杆菌感染后胃癌发生的易感基因型。方法例胃癌患者癌旁正常胃粘膜组织和55例慢性胃炎患者胃粘膜组织，均经快速尿素酶和PCR检测HP，应用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性分析技术，进行基因型检测，并对C/C、T/T进行测序，比较各基因型在胃癌组和胃炎组中的分布差异。结果IL1B31T、IL1B511T等位基因和IL1B31T/T、IL1B

2、511T/T基因型在胃癌组的分布频率高于胃炎组(P【关键词】白细胞介素1B；基因多态性；胃癌；幽门螺杆菌胃癌是由环境因素和遗传因素共同引发的恶性肿瘤。在环境因素中，HP感染是主要因素，被认为是胃癌发生的启动因素和促进因素。目前世界上已有半数以上的人被HP感染，但其中大多数为无症状感染者，只有极少数发展成胃癌，因而认为存在这些差别的原因既有HP本身的因素，也有宿主本身的因素。为此，本实验在湖南衡阳地区以慢性胃炎患者作为对照，探讨该地区患者被HP感染后IL1B31和IL1B511基因多态性与胃癌发生

3、的关系。1材料和方法材料实验组：72例胃癌标本均来自XX年3月～XX年12月南华大学附一医院，经病理确诊(贲门癌除外)，所有病例术前均未行放疗或化疗，术前2周未口服抗生素治疗。取胃窦部约癌旁正常粘膜组织(距癌灶>5cm)分为2块，1块行快速尿素酶检测HP,1块切成米粒大小置于-80℃冰箱冻存。实验组及对照组患者均来自于湖南衡阳地区。对照组：70例标本来自本院胃镜室活检组织，无系统性红斑狼疮、炎性肠病、类风湿性关节炎和胃癌家族史，术前2周未口服抗生素治疗,病理确诊为慢性浅表性胃炎。取胃窦粘膜组织2块，1块行

4、快速尿素酶检测HP，1块置于-80℃冰箱冻存。实验方法基因组DNA的提取实验组胃窦部癌旁正常粘膜组织和对照组胃窦部粘膜组织，各取米粒大小一块，分别放入无菌EP管中用无菌眼科剪剪碎，按照上海生工DNA抽提试剂盒要求操作，DNA提取后于-20℃冰箱中保存。HP的检测快速尿素酶法检测HP试剂盒由福建三强公司提供，按试剂盒要求操作，加入组织样本后5min内颜色逐渐变红为阳性，不变色则为阴性。PCR检测幽门螺杆菌(HP)UreA基因试剂盒由上海生工提供，引物参照文献[1]由上海生工合成，上游：5’GCCAATGGT

5、AAATTAGTT3’；下游：5’CTCCTTAATTGTTTTTAC3’；扩增出的UreA基因片段长度为411bp。反应体系为25μl，包括PCRMasterμl，上、下游引物各1μl，模板DNA1μl,去离子水μl。反应条件为94℃min1个循环；94℃1min，47℃1min，72℃1min，35个循环；72℃延伸10min。产物于2%的琼脂糖凝胶电泳，100V恒压30min，紫外灯下观察结果。出现411bp橙色条带的为HP阳性，无条带则为阴性，见图1。(3)诊断标准及检测结果所有标本经两种方法检测

6、HP，两种方法同为阳性则为HP阳性，同为阴性则为HP阴性，一阳一阴者剔除。最后测出实验组标本52例，对照组标本55例。基因多态性检测(1)IL1B31和IL1B511位点PCR扩增引物由上海生工合成，序列为：IL1B31上游：5＇M：100bpDNAmarker；14：HP阳性结果；5：阴性结果图1HPUeaA基因检测结果照片AGAAGCTTCCACCAATACTC3’下游：5’AGCACCTAGTTGTAAGGAAG’。IL1B511上游：5’TGGCATTGATCTGGTTCATC

7、’下游：5’GTTTAGGAATCTTCCCACTT’。扩增体系均为25μl，包括PCRMasterμl，上、下游引物各1μl，模板DNA1μl,去离子水μl。反应条件为94℃min1个循环；94℃0s，57℃0s，72℃5s，35个循环；72℃延伸10min。产物于2%的琼脂糖凝胶电泳，100V恒压30min，紫外灯下观察结果。(2)PCR扩增产物的限制性内切酶消化酶切体系为20μl，其中内切酶μl，PCR产物5μl，缓冲液2μl，去离子水μl，37℃水浴4h。琼脂糖凝胶电泳及结果判定：3%的琼脂糖凝胶

8、电泳，100V恒压50min，紫外灯下观察结果。IL1B31位点存在C→T的基因多态性现象，为AluI酶切位点，基因型31C/C不被切开，只有239个为一个片段；31C/T产生239bp、137bp和102bp三个片段；31T/T产生137bp和102bp两个片段，见图2。IL1B511位点也存在C→T的基因多态性现象，为AvaI酶切位点，基因511C/C酶切后产生190bp和115bp两个片段；511C/T