酸敏感离子通道阻断剂amiloride对佐剂性关节炎大鼠关节软骨损伤的影响

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1、万方数据中国药理学通报ChinesePh汜rmacologwalBulletin2009Jul；25(7)：895-900·895·酸敏感离子通道阻断剂amiloride对佐剂性关节炎大鼠关节软骨损伤的影响袁凤来1’2，陈飞虎1，陆伟国2，李霞1，吴繁荣1，张腾跃1，主玉2(1．安徽医科大学药学院，安徽合肥230032；2．江苏省无锡市第三人民医院，江苏无锡214041)中国图书分类号：R-332；R322．72；R348．1；R684．302．2；R684．305．3：R977．6文献标识码：A文章编号：1001—1978(20

2、09)07—0895—06摘要：目的探讨酸敏感离子通道(ASICs)阻断剂amiloride对佐剂性关节炎(AA)大鼠关节软骨损伤的影响。方法将大鼠随机分成正常组，AA模型组，amiloride50、100、150mg·kg“组，地塞米松(0．2rag·kg。1)对照组。弗氏完全佐剂(CFA)致炎后第lO天起，从大鼠出现继发性炎症，此时腹腔注射amiloride、地塞米松，正常组与模型组灌胃等容量的无菌注射用水，连续7d。实验结束后，体外用激光共聚焦显微镜检测细胞ca2+浓度，分析胞外低pH值和ASICs阻断剂amiloride对

3、关节软骨细胞内钙离子浓度([ca“]；)的影响；用足容积法测量继发侧足肿胀度，用免疫组织化学方法分析大鼠关节软骨Ⅱ型胶原的表达，用alcian蓝染色检测大鼠关节软骨蛋白多糖的变化。结果细胞外pH(pH6．5)可使关节软骨细胞内Ca2+水平短暂性升高，amiloride能明显抑制pH6．5诱导的关节软骨胞内Ca2+水平；各用药组能明显升高AA大鼠关节软骨细胞基质成分Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达量。结论amiloride可能通过阻断酸敏感离子通道减轻从大鼠关节软骨破坏，发挥关节保护作用。关键词：amiloride；佐剂性关节炎；关节软骨；酸

4、敏感离子通道类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis，RA)是一种自身免疫性疾病，其主要病理特点是滑膜细胞增生，衬里层增厚，炎细胞浸润，以及软骨和骨组织的破坏，最终导致关节畸形和功能障碍。关节软骨和骨组织的破坏是致残的根本原因，积极寻找导致关节软骨破坏及骨组织病理生理改变的关键环节是防治该病的重点⋯。软骨细胞本身的代谢在关节软骨细胞外基质(extraeellarmatrix，ECM)合成以及修复中起关键作收稿日期：2009—02—17，修回日期：2009—03—12基金项目：国家自然科学基金资助项目(No305721

5、96，30873080)作者简介：袁凤来(1977一)，男，硕士，药师，研究方向：分子药理学，Tel：0551-5831757。E-mail：bjjq88@163．com；陈飞虎(1962一)，男，博士，教授，博士生导师，研究方向：分子药理学，Tel：0551-5161115，E·mail：clhchina@sohu．com用。组织酸化影响关节软骨细胞生长代谢，细胞外pH降低，可以激活与关节软骨破坏相关的基质金属蛋白酶，引起关节软骨的破坏旧J。最近研究发现，对于胞外pH的变化，细胞可以通过酸敏感离子通道(acidsensingio

6、nchannels，ASICs)途径去感受胞外的pH改变。ASICs是一类由胞外酸化所激活的阳离子通道，近年来研究表明¨JASICs在脑缺血、癫痫、肿瘤等伴有局部组织酸化的病理过程中发挥重要作用。组织酸化是炎症病理下常见的现象，但对ASICs是否参与由组织酸化诱导关节软骨损伤的病理生理过程，以及阻断ASICs对炎症损伤的关节软骨是否有保护作用尚不清楚。本实验以弗氏完全佐剂(completeFreund’Sad-juvant，CFA)诱导佐剂性关节炎(adjuvant-inducedarthritis，AA)大鼠模型为研究对象，研究

7、ASICs非特异性阻断剂amiloride对AA关节软骨损伤的影响，探讨ASICs在类风湿性关节炎中可能发挥的作用。1材料与方法1．1材料1．1．1动物的选择及分组Sprague—Dawley(SD)大鼠，早i5不限，体重160g±20g，由安徽医科大学实验动物中心提供。合格证号：皖医实动准字第01号。将大鼠随机分成AA模型组、正常组、amiloride50、100、150mg·kg。1组、地塞米松(0．2mg·kg“)对照组。实验室温度控制在20。C一25℃，湿度在50％～60％，自由饮水。1．1．2主要试剂与仪器卡介苗(bac

8、illuscalmette—guerin，BCG)，卫生部上海生物制品所产品(编号：200606002)，用前80。C灭活；amiloride，为Sigma公司产品；II型胶原酶，美国Sigma公司产品，临用前用无Ca“、Mg“D—Hanks液配制