酸敏感离子通道1a表达沉默对aa大鼠关节软骨细胞凋亡的影响

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1、目录一、英文缩略词…………………………………………………………1二、中文摘要……………………………………………………………3三、英文摘要……………………………………………………………5四、正文………………………………………………………………71.前言………………………………………………………72.实验材料………………………………………………………83.实验方法………………………………………………………114.实验结果………………………………………………………275.讨论……………………………………………………………456.小结………

2、……………………………………………………51五、参考文献……………………………………………………………52六、附录………………………………………………………………57七、致谢………………………………………………………………59八、综述……………………………………………………………60九、参考文献……………………………………………………………704英文缩略词表Abbreviation英文缩写英文全称中文全文AAAdjuvantarthritis佐剂型关节炎APAmmoniumpersulfate过硫酸铵ASIC1aAcidsensin

3、gionchannel1a酸敏感离子通道1a型AV-PIAnnexinV-FITC/PI磷脂结合蛋白/碘化丙啶BpBasepair碱基对cDNAComplementaryDNA反转录DNACOⅡTypeⅡcollagenⅡ型胶原Dulbecco’smodifiedEagle’sDMEM培养基DMEMmediumDMSODimethylsulfoxide二甲基亚砜EBEthidiumbromide溴化乙啶FCSFetalcalfserum胎牛血清gGram克hHour小时mgMilligramme毫克minMinute分N.S.Nor

4、malsaline生理盐水ODOpiticaldensity光密度1OPTI-MEMReducedserummedia无血清培养基PolyacrylamidegelPAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳electrophoresisPCRPolymerasechainreaction聚合酶链式反应PBSPhosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液PhenylmethanesulfonylPMSF蛋白酶抑制剂fluoridePGProtein-polysaccharide蛋白多糖Real-timefluorescentq-RT-PC

5、R实时荧光定量PCRquantitativePCRRARheumatoidarthritis类风湿性关节炎rpmRevolutionperminute转/分sSecond秒SDSSodiumdodecylsufate十二烷基硫酸钠TerminaldeoxynucleotidylTUNELtransferase-mediateddUTP原位末端转移酶标记技术nickending-labelingWBWesternBloting免疫印迹法2酸敏感离子通道1a表达沉默对AA大鼠关节软骨细胞凋亡的影响研究生江晟导师陈飞虎教授（安徽医科大学药

6、学院，合肥，230032）中文摘要目的：通过小分子干扰RNA(siRNA)技术，建立大鼠关节软骨细胞中酸敏感离子通道1a(ASIC1a)表达沉默模型，观察ASIC1amRNA及其蛋白的相对表达量的变2+化，检测ASIC1a通道不同表达水平的Ca内流变化以及对酸化诱导细胞凋亡的影响，并通过监测凋亡相关基因Bax、Bcl-2mRNA的相对表达水平，研究酸敏感离子通道1a的表达沉默对AA大鼠关节软骨细胞凋亡可能的作用机制。方法：通过化学合成法合成特异性荧光短链ASIC1asiRNA-FAM，使用Lipofectamine2000转染试剂盒

7、将ASIC1asiRNA转染入关节软骨细胞，采用荧光显微镜、流式细胞术、实时荧光定量PCR(q-RT-PCR)及WesternBlot法检测siRNA转染效率及其对ASIC1amRNA和蛋白表达的抑制作用。同时采用胞外酸2+化的方法建立AA大鼠关节软骨细胞凋亡体外模型，激光共聚焦技术检测[Ca]i水平，Annexin-V/PI流式细胞术、Hoechst33258染色法、Tunel法检测各组细胞凋亡情况，免疫细胞化学技术检测软骨细胞分泌的Ⅱ型胶原含量变化，q-RT-PCR检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2的mRNA的相对表达水平。结果

8、：1.实验设计的3个ASIC1a-siRNA均能成功转染入大鼠关节软骨细胞，且转染siRNA-3后大鼠关节软骨细胞中ASIC1amRNA表达显著低于正常组，最大抑制率为84.8%；WesternBlot结果显示，转染特异性siRNA-