重组大鼠血小板衍生生长因子rrpdgfaa对体外培养大鼠椎间盘细胞促增殖的影响作用

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1、万方数据虫国理岱药堑应垣!Q堕至!旦筮!鲞筮!!翅堡照垫!丛型堡坐g垒殴!：垒竖!Q塑：!丛：!：奠!：!鱼数；②菌液组：测定所加的试验菌数。除不加供试液外，操作同试验组；③供试品对照组：测定供试品本底菌数。除不加菌液外，操作同试验组：④稀释液对照组：考察供试液制备过程中微生物受影响的程度。取稀释液1ml替代供试品，其余同试验组；⑤回收率计算稀释剂对照组的菌回收率(％)=(稀释剂对照组平均菌落数／菌液组平均菌落数)×100％；试验组的菌回收率(％)=[(试验组平均菌落数．供试品对照组平均菌落数)／菌液组平均菌落数]X100％；⑥结

2、果判断：试验组和稀释剂对照组的菌回收率均应不低于70％。2结果经试验验证，各试验菌株及稀释剂对照组菌回收率大于70％，符合规定。结果见表1。表1菌回收率测定结果(％)1．2．4控制菌检杳方法的验证1．2．4．1金黄色葡萄球菌试验组：取供试液的上清液10IIll，置于有100ml稀释液的薄膜过滤器内，过滤、冲洗3次，100ml／次，最后1次加入10—100cfu／ml金黄色葡萄球菌菌液1ml，抽滤，取f{{滤膜加入到100ml营养肉汤培养基中，培养18～24h后，取}：述培养物。划线接种于卵黄氯化钠琼脂培养基平板上，培养24—72h

3、。阴性菌对照组：方法同试验·37·组，加入10～100cfu／ml大肠埃希菌菌液lml代替金黄色葡萄球茵菌液。同时作稀释液和培养基阴性对照。1．2．4．2铜绿假单胞菌试验组：供试液的过滤、冲洗同金黄色葡萄球菌试验组，最后1次冲洗液中加入10～100cfu／IIll铜绿假单胞菌菌液1ml，抽滤，取出滤膜加入到100ml胆盐乳糖培养基中，培养18～24h后，取上述培养物，划线接种于溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基平板上，培养18～24h。阴性菌对照组：方法同试验组，加入10—100cfu／ml大肠埃希菌菌液lml代替铜绿假单胞菌菌液。同时

4、作稀释液和培养基阴性对照。1．2．4．3结果控制菌检查方法验证试验组阳性菌对照金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌均能检出，阴性菌对照均末检出大肠埃希菌。说明本法具有专属性，符合验证规定。3讨论薄膜过滤能使微生物充分被滤膜截留，再用适量无干扰的冲洗液洗去供试样品的干扰，就能准确地进行样品的微生物限度检查。冲洗液的用量是关键，如过量冲洗，会使菌体受损、不利于生长，从而影响回收率，还会使滤膜受损、孔径改变，影响实验结果。反之，如冲洗不充分，样品抗菌作用就不能彻底消除，也无法保证实验结果的准确性。参考文献[1]国家药典委员会编．中国药典．化学工

5、业出版社，2005年版，二部．附录93．重组大鼠血小板衍生生长因子(rR—PDGF—AA)对体外培养大鼠椎间盘细胞促增殖的影响作用张泓毅马迅·临床医学·【摘要】目的了解重组大鼠血小板衍生生长因子(rR—PDGF．AA)在大鼠椎间盘细胞培养过程中的促增殖作用。方法对大鼠椎间盘细胞单层培养并于传代后建立对照组与实验组，定时于倒置显微镜下观察细胞形态、增殖的变化，行HE、甲苯胺蓝及免疫组化染色；对传代细胞于固定时间测定细胞吸光度值(OD)，并描绘细胞生长曲线；经流式细胞仪检测处于S(DNA合成)期的细胞百分比值。结果①在倒置相差显微镜下

6、连续观察，7d后原代细胞逐渐贴壁，多为梭形，有伪足伸出；经胰酶消化传代后，细胞贴壁生长速度加快约需4～5d，而加入血小板衍生生长因子组椎间盘细胞汇合时间缩短，生长加速。HE染色可见细胞形态及胞内变化，甲苯胺蓝及免疫组化染色分别可见细胞外蛋白多糖及Ⅱ型胶原合成增加；②MrlTll法测定OD值经过方差分析检验可知，F值为20．276，P=0．000，说明五组之间比较差异具有显著性。五组之间两两比较得出对照组、1斗g／L组和10¨g／L组之间比较无差异，1000斗g／L组和100斗g／L组之间比较无差异，对照组、l斗g／L组、10斗g／

7、L组分别与1000¨g／L组、100斗g／L组比较差异具有统计学意义；③经流式细胞仪检测可见血小板衍生生长因子在有效浓度内与处于s期的细胞百分比呈正相关。结论血小板衍生生长因子对体外培养的椎间盘细胞的分裂增殖、基质中胶原及蛋白多糖的合成具有促进作用；并且在有效剂董范围内呈现正相关。【关键词】细胞培养；生物学特性；rR．PDGF．AA；MTF法；流式细胞仪许多学者认识到椎间盘退变有其细胞学基础，包括椎间盘细胞上E常基因表达，细胞外基质成分的合成和分泌，适应负载和运动要求的细胞外基质的维持和重构。近年来体内椎问盘细胞生物学特性及退变也

8、有了深入进展。血小板衍生生长因子是哺乳动物和人体中一种微量但具有多种生物作者单位：030001山西医科大学2007级在读硕士研究生(张泓毅)；山西医科大学第二临床医学院(马迅)学活性的多肽，在软骨形成和软骨自稳态调节中起关键作用。本实验利用体外培养