水飞蓟素对LPS诱导的奶牛蹄真皮炎症细胞CYP450表达的影响

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1、硕士学位（毕业）论文水飞蓟素对LPS诱导的奶牛蹄真皮炎症细胞CYP450表达的影响学位申请人：田梦悦指导教师：马玉忠教授学科专业：临床兽医学学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一八年五月二十五日分类号：S853.74单位代码：10086密级：公开学号：20152200409水飞蓟素对LPS诱导的奶牛蹄真皮炎症细胞CYP450表达的影响EffectofSilymarinonCYP450ExpressioninLPS-InducedHoofDermalInflammatoryCellsofDairyCows学位申请人：田梦悦指导教师：马玉忠教授学科专业：临床兽医学学

2、位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一八年五月二十五日摘要蹄病是奶牛的主要疾病之一，在奶牛蹄病中以蹄叶炎最为多见，蹄叶炎所导致的经济损失是巨大的，这严重制约着奶牛养殖业的发展。然而，蹄叶炎的病因及发病机制至今尚未明确，因而缺乏有效的诊断及防治手段。为探讨这一问题，本研究通过LPS诱导奶牛蹄真皮细胞建立炎症模型，水飞蓟素处理炎症细胞，研究一系列炎症相关因子、信号通路以及CYP450的表达，在细胞和分子水平上探讨奶牛蹄叶炎的发病机制，为奶牛蹄叶炎的防治提供依据。本研究中，用蹄真皮的组织块贴壁培养来分离奶牛的蹄真皮细胞，所获得的细胞生长良好，生长曲线符合细胞的增殖特性。

3、以不同浓度的LPS处理蹄真皮细胞，收集不同时间段的细胞上清液及细胞总蛋白，ELISA法检测上清液中IL-1β、TNF-ɑ的含量，WesternBlot法检测p65NF-κB、p38MAPK蛋白的表达。结果显示，一定浓度的LPS可促进蹄真皮细胞IL-1β、TNF-ɑ的分泌，并对p65NF-κB、p38MAPK蛋白的表达有促进作用，LPS作用48h比作用24h促炎作用更为显著，10μg/mLLPS是诱导奶牛蹄真皮细胞炎症的最适浓度。通过MTT法检测水飞蓟素的细胞毒性，以确定后续试验的安全用药范围。结果表明，浓度≤20μg/mL的水飞蓟素作用于奶牛蹄真皮细胞48h后，未表现毒性作用。以

4、10μg/mLLPS建立炎症模型，用不同浓度的水飞蓟素与10μg/mLLPS共同处理蹄真皮细胞，收集细胞上清液及细胞总蛋白，检测IL-1β、TNF-α的含量以及p65NF-κB、p38MAPK蛋白的表达，提取细胞总RNA，反转录为cDNA，PCR法检测CYP3A4、CYP1A1mRNA的表达，研究水飞蓟素的抗炎作用及其对LPS诱导的奶牛蹄真皮炎症细胞CYP450表达的影响。结果表明，本试验中的各组水飞蓟素作用48h均能显著抑制蹄真皮炎症细胞IL-1β、TNF-α的分泌（P<0.05）；一定浓度的水飞蓟素可抑制p65NF-κB、p38MAPK蛋白的表达；1、5μg/mL的水飞蓟素可

5、促进CYP3AA4、CYP1A1mRNA的表达，以1μg/mL作用效果最为明显。结论：通过蹄真皮组织块的贴壁培养，可成功分离并获得奶牛蹄真皮细胞。一定浓度的LPS可促使奶牛蹄真皮细胞炎症因子IL-1β、TNF-α分泌量增加，并促进p65NF-κB、p38MAPK蛋白的表达，10μg/mL的LPS作用效果最为明显，可依此浓度构建奶牛蹄真皮细胞炎症模型。一定浓度的水飞蓟素可显著抑制由LPS诱导的奶牛蹄真皮炎症细胞IL-1β、TNF-α的分泌，抑制p65NF-κB、p38MAPK蛋白的表达，促进CYP3AA4、CYP1A1mRNA的表达。1μg/mL作用效果最佳。关键词：奶牛；蹄真皮细

6、胞；CYP450；水飞蓟素EffectofSilymarinonCYP450ExpressioninLPS-InducedHoofDermalInflammatoryCellsofDairyCowsGraduatecandidate:TianMengyueAdvisor:Prof.MaYuzhongMajor:ClinicalVeterinaryMedicineAbstractHoofdiseaseisoneofthemajordiseasesofdairycows,amongwhichlaminitisisthemostcommonone.Economiclossescause

7、dbylaminitiswereenormous,whichwereseverelyrestrictedthedevelopmentofdairyfarming.However,theetiologyandpathogenesisoflaminitishavenotbeenclarifiedyet,sotherewerenoeffectivediagnosisandcontrolmeasures.Toexplorethisissue,aninflammatorymodelinho