丹参水提物对lps诱导子宫内膜上皮细胞炎症的抗炎机制研究

《丹参水提物对lps诱导子宫内膜上皮细胞炎症的抗炎机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、密级:论文编号:中囯农亚科学院学位论文丹参水提物对LPS诱导子宫内膜上皮细胞炎症的抗炎机制研究StudyonAnti-inflammatoryMechanismofSalviaMiltiorrhizaExtractagainstEndometriumEpithelialCellsInflammationinducedbyLPS硕士研究生：邝晓娇指导教师：严作廷研宄员申请学位类别：农学硕士专业：I丨紹繪医学研究方向：奶牛痴^诊断培养单位：兰H、丨離与讓®胱所中国农®斗学院研^完2015年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalScienc

2、esDissertationStudyonAnti-inflammatoryMechanismofSalviaMiltiorrhizaExtractagainstEndometriumEpithelialCellsInflammationinducedbyLPSM.S.Candidate：KuangXiaojiaoSupervisor：YanZuotingMajor：ClinicalVeterinaryMedicineSpecialty:DiseasesDiagnosisinDairyCowMay2015摘要子宫内膜上皮细胞的炎性病变是奶牛子宫内膜炎发病的根本所在，探究炎症过程

3、中上皮细胞结构与功能的变化，将有助于阐明疾病发病机制和治疗药物的研发。丹参是广泛用于治疗奶牛子宫内膜炎的中药之一，但从子宫内膜上皮细胞研究丹参的作用机制的报道较少。为了探讨丹参水提物对LPS诱导的炎症模型的保护机制，开展了以下研究。1.筛选LPS诱导炎症模型的最佳剂量和作用时间。设置5个不同浓度LPS分别作用于山羊EEC6h、12h、24h后，MTT法检测EEC的细胞活性。结果表明5μg/mLLPS作用12h时促进细胞增殖作用最为明显，在此基础上，建立EEC炎症模型，ELISA检测模型组中TNF-α和IL-1β含量显著高于对照组（P<0.01），故确定LPS最佳致炎剂量为5μg

4、/mL，最佳作用时间是12h。2.筛选SME对EEC最佳作用剂量。以6个不同浓度的SME作用EEC24h，结果表明SME对EEC未产生明显毒性，且促进EEC增殖。由此确定SME作用浓度分别为250μg/mL（高剂量组）、100μg/mL（中剂量组）、10μg/mL（低剂量组）。3.SME对EEC炎症模型中TNF-α、IL-1β、NO、PGE2、TLR4、CD14、MMP-2、MMP-9等蛋白表达的影响。分别用高、中、低剂量的SME处理EEC细胞炎症模型，观察SME作用0h、4h、6h、12h、18h、24h、36h后各项指标的变化。结果表明，模型组中TLR4、CD14、TNF-

5、α、IL-1β、NO、PGE2、MMP-2和MMP-9等蛋白在各自到达峰值时含量均明显高于对照组（P<0.01）；不同浓度SME作用炎症模型后，均能使这些指标降低，且高剂量SME作用效果最为明显（P<0.01）。4.SME对EEC炎症模型中相关基因表达的影响。实时荧光定量PCR检测SME对EEC炎症模型中相关基因表达，结果表明，模型组中TNF-α、IL-1β、TLR4、CD14、MMP-2、MMP-9mRNA基因表达水平到达峰值时显著高于对照组（P<0.01）。用高、中、低剂量的SME处理后均能降低细胞炎性因子TNF-α、IL-1β、TLR4、CD14、MMP-2、MMP-9的

6、表达，且高剂量SME作用最为明显（P<0.01）。另外，随着作用时间的延长，MMP-2、MMP-9表达逐渐降低，24h后明显低于对照，SME作用后又逐渐恢复到正常水平。综上所述，EEC炎症反应的发生可能与LPS诱导激活TLR信号通路（TLR4、CD14），进而上调细胞因子（TNF-α、IL-1β）、炎症介导因子(NO、PGE2）和基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)的表达有关。而SME作用于炎症细胞后，通过降低炎症介导因子、TLR信号通路的表达，达到减缓炎性反应的程度；在炎症反应初期，SME通过下调MMPs的表达，抑制了子宫内膜细胞结构被降解的炎性损伤，并在炎症反应后期通过

7、上调MMP-2、MMP-9的表达，从而提高子宫自我修复重塑的能力。以上可能是LPS诱导炎性反应的发生机制和丹参提取物的抗炎作用机制发挥的途径，但其具体机制尚需进一步研究。关键词：子宫内膜上皮细胞，细胞炎症模型，丹参水提物，LPSIAbstractAstherootcauseofendometritisliedintheinflammatorychangesofendometriumepithelialcells(EECs),soitwasnecessarytoexplorethedamage