鱼腥草素钠抗LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎症的分子机制.docx

《鱼腥草素钠抗LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎症的分子机制.docx》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、鱼腥草素钠抗LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎症的分子机制奶牛产后子宫内膜炎是由致病微生物上行感染母牛生殖道而引起的炎症。大肠杆菌是主要的致病菌之一,但其发病机制并不十分清楚。鱼腥草素钠(Sodiumhouttuyfonate,SH)是鱼腥草有效成分鱼腥草素的亚硫酸氢钠加成化合物,稳定性强,临床上用于治疗炎症疾病。目前鱼腥草素钠对抗炎症疾病的分子机制还不完全清楚,我们假设NF-κB充当关键调解物,从体外细胞水平探明其抗炎分子机制。并在体内对小鼠子宫内膜炎模型和奶牛子宫内膜炎的疗效进行观察。从而深入研究SH抗炎活性和其药理机制。本研究运用体外原代培养细胞的方法,分离鉴定

2、了奶牛子宫内膜上皮细胞和基质细胞。并对培养获得的原代细胞进行了不同染色方法的形态学观察和透射电镜观察。在此基础上,建立LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞(bEECs)炎症模型。为了评估SH的体内外抗炎作用,首先用MTT法和LDH分析检测梯度浓度的SH对bEECs的毒性；其次用ELISA和qRT-PCR方法分别从蛋白分泌和nRNA表达两个水平检测细胞炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8,同时用westernblotting的方法检测细胞内炎症信号转导通路MAPKs/NFκ-B的关键蛋白ERK、JNK、p38、IκBα和NF-κBp65;最后用临床诊断的方法评

3、估SH治疗小鼠和奶牛子宫内膜炎的疗效。研究表明,运用组织培养和复合酶消化结合差时技术可以分离出纯度很高的bEECs,为后续的实验提供了足够的细胞。不同染色方法对子宫内膜细胞观察可知其细胞结构清晰,胞浆胞膜分明；超微结构观察结果显示,体外培养的子宫内膜上皮细胞可清晰看到微胞凸,胞内各种细胞器清晰可见。细胞毒性实验显示,SH(120μg/mL)浓度范围内对bEECs无毒副作用；15,30and60μg/mL高中低浓度的SH可以抑制LPS诱导bEECs的TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的蛋白分泌水平,并呈浓度依赖关系；对炎性细胞因子的mRNA有同样的调控作用。而且

4、,在LPS激活的bEECs中,SH抑制了IκBα的降解和NF-κBp65的磷酸化；压制了ERK、JNK、p38磷酸化水平。体内疗效实验证实,SH能够显著减弱模型组小鼠子宫内膜的炎性反应,子宫指数与正常对照组差异不显著,镜检子宫组织显示显微结构基本正常,表明SH对实验性子宫内膜炎模型小鼠有很好的治疗效果。用SH治疗奶牛临床型子宫内膜炎受孕率达到86%,发情头数占总头数的91.7%。而用土霉素治疗奶牛受孕率为50%,发情头数占总头数的67%。在发情头数和受孕率上SH的治疗效果优于土霉素。