溴甲酚绿法测定壳聚糖的含量

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1、李中阅票研久i学i报tyJournalofChinaPharmaceuticalUnivers2005,36(6):543一545澳甲酚绿法测定壳聚糖的含量郑铁生“，王亚娜2，宗爱萍“(’江苏大学医学技术学院，镇江212001;z镇江科力生物技术有限公司，镇江212001)【关键词】分光光度测定法;澳甲酚绿法;壳聚糖;含量侧定【中图分类号】8917【文献标识码】A【文章编号】100(〕一5048(2005)06一0543一。壳聚糖(chitosan)是由氨基葡萄糖和N一乙酞基壳聚糖样品取待测壳聚糖(镇江科力生物技葡萄糖通过

2、件1,4一糖昔键连接起来的直链多糖，在术有限公司))0.500g，用0.167moUL乙酸溶液定容医药、食品、日化、环保等领域具有广泛的应用前至100ML.景川，己成为相关领域研究的热门课题。目前，测10岁L壳聚糖标准储存溶液称取壳聚糖(生定壳聚糖含量的方法有:酸水解间接比色法[[2l、滴化试剂级，上海源聚生物科技有限公司，脱乙酞度定法[3,4〕和分光光度法〔5,61。酸水解间接比色法操大于90%)1.000g，用0.167mol/L乙酸溶液定容作比较繁琐，且不适于微量样品的分析。滴定法可至100mLa分为酸碱滴定法〔’〕

3、和水解滴定法叫，酸碱滴定法以5岁L壳聚糖标准溶液配制称取壳聚糖(生甲基橙作指示剂，方法简单，但由于是胶体溶液，因化试剂级，上海源聚生物科技有限公司，脱乙酞度此终点时变色不明显，且易产生沉淀，干扰测定;水大于90%)0.500g，用0.167mol/L乙酸溶液定容解滴定法样品需水解20min，滴定要求高，操作烦至100MLa琐，且不适合微量样品的分析。分光光度法用茜素10mmol/LBCG储存溶液称取BCG(分析红[51或锌试剂困与壳聚糖在一定酸度条件下的显级，M,720.02Da)1.800g，溶于1mol/LNaOH溶液

4、色反应厕定壳聚糖的含量，但测定的线性范围只有5mL中，用蒸馏水定容至250mLo0一0.2mg/mL，且色素会吸附比色杯。0.05%菌霉克星〔'IPK-PO401(镇江科力生物技澳甲酚绿(bromocresolgreen,BCG)是一种用于测术有限公司)储存液取PK-PO4010.05mL，用蒸定血清白蛋白的试剂[71，作为多糖分析试剂的研究，馏水定容至100ML.目前尚未见文献报道。本文利用BCG与壳聚糖的0.083mol/L聚氧乙烯)35一十二烷基醚(Brij-特异性显色反应，其复合物在620nm处吸收值的变35)储存

5、液称取Brij-351g，溶于蒸馏水8mL中，化与壳聚糖含量成线性关系的特点，建立了一种高加温助溶，冷却后加蒸馏水至10MLo选择性、高灵敏度简便快速测定壳聚糖含量的方法。0.02mmol/LBCG应用溶液在100ML的量1材料瓶内加蒸馏水约40ML,pH值为4.4的醋酸一醋酸1.1仪器钠缓冲液10ML，精确加人BCG储存液2.0mL，加722分光光度计(上海第三分析仪器厂);UV-菌霉克星PK-PO401储存液0.25mL,Brij-35储存液210紫外分光光度计(日本岛津);电子自动天平1.25mL，加蒸馏水定容。(上

6、海天平仪器厂)。1.3实验方法1.2试剂取3支试管，分别加入0.167mol/L醋酸，0.167mol/L乙酸溶液称取乙酸(分析纯，上5盯】壳聚糖标准溶液以及待测样品溶液1.0ML,海化学试剂有限公司)1g，用蒸馏水定容至100再各加人BCG应用溶液2.0mLo3管分别为空白ML.管、标准管和测定管。【收稿日期】2005-06-29【‘通讯作者】Tel:0511一5039779E-mail:jsdxzts@163.com中阅票科大李学报JournalofChinaPharnutceuticalUniversity第36卷各

7、管于37℃水浴5min，用722型分光光度度。结果表明，pH4.4时反应体系溶液在620nm计，在620nn处以空白管调零，分别测定标准管和处吸收度最高(图2B).测定管的吸收度。0.52结果与讨论0.40.3叫2.1吸收光谱曲线0.2图1是不同壳聚糖浓度下，BCG-壳聚糖复合0.1一00物在400一800nm间扫描得到的吸收光谱图。结13名20名27刀34.641.248.43.84.0424滩4.64名5.05.2('=,;;/(mmol.L-1pH果表明，当向BCG中加人壳聚糖时，随着壳聚糖浓一.-Control;一

8、▲-sample度增大，425run处吸收峰逐渐降低，在620rim处吸Fig.2A:EffectsofBrij-35concentrationsontheabsor)anceofBCG-收峰不断升高，反应体系由黄色变成绿色并逐渐加chitosan;B:EffectsofpHonofabsorbance