溴甲酚绿法测定血清白蛋白ppt课件.ppt

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1、实验五溴甲酚绿法测定血清清蛋白一、实验目的掌握：溴甲酚绿法测定血清清蛋白的基本原理和操作。熟悉：血清清蛋白测定的临床意义。了解：溴甲酚绿法测定血清清蛋白的特点和注意事项。1二、实验原理pH=pI+OH-pH>pI+H++OH-+H+pH

2、浓度成正比。与同样处理的清蛋白标准比较，可求得血清中清蛋白含量。二、实验原理清蛋白+BCG蓝绿色复合物+-pH4.2Brij-353三、试剂与器材1.0.5mol/L琥珀酸缓冲贮存液2.10mmol/LBCG贮存液3.叠氮钠贮存液4.聚氧化乙烯月桂醚（Brij-35）贮存液5.BCG试剂6.40g/L清蛋白标准液7.分光光度计ddH2O400mL琥珀酸缓冲贮液100mLBCG贮液8.0mL叠氮钠贮液2.5mL，Brij-35贮液2.5mL，ddH2O定容至1000mL。4立刻混匀后，在波长630nm处用空

3、白管调零，30s±3s内读取吸光度。加入物（mL）空白管（B）标准管测定管S1S2U1U2血清———0.020.02白蛋白标准液—0.020.02——蒸留水0.02————BCG试剂4.04.04.04.04.0四、操作5五、计算血清清蛋白(g/L)＝Āu/Ās×蛋白标准液浓度(g/L)=Āu/Ās×40(g/L)参考范围：正常人:35－55g/L6六、注意事项1.BCG是一种pH指示剂，变色域为pH3.8（黄色）~5.4（蓝绿色），因此控制反应液的pH是本法测定的关键。2.时间必须控制准确。因为BCG不

4、但与清蛋白呈色，而且与血清中多种蛋白质成分呈色，其中以a1-球蛋白、运铁蛋白、结合珠蛋白更为显著，其反应速度较清蛋白稍慢。由于在30s内呈色对清蛋白特异，故BCG与血清混合后，在30s内读数可明显减少非特异性呈色反应。7七、方法学评价1.本法操作简便、快速，胆红素、溶血和中度脂血症无干扰，既可手工操作，也能自动分析，是目前国内测定血清清蛋白的最常用方法。2.本法线性范围为10~60g/L，RCV<4%。但该法与溴甲酚绿紫法比较，对血清清蛋白特异性稍差，3.重复性差，清蛋白特异性稍差（极性氨基酸参与反应，但

5、参与运输的球蛋白也会与染料反应，不过反应速度较慢）。4.溴甲酚紫法：特异性较好，但不能与动物血清反应，而目前的质控血清多为动物血清，因此临床应用少。4.电泳法：可以将白蛋白、球蛋白等分开，并分别测定其含量，是种较好的方法，但过程相对复杂。8八、临床意义1.血清清蛋白：常见于严重脱水所致的血浆浓缩。（比较少见）2.血清清蛋白:临床比较重要和常见，常与总蛋白降低的原因大致相同。急性：多见于大出血和严重烧伤。慢性：肾病蛋白尿、肝功能受损，肠道肿瘤及结核伴慢性出血、营养不良和恶性肿瘤。若低于20g/L，临床上出现

6、水肿。3.A/G比值：正常人A/G>1.0某些病人可同时出现清蛋白减少和球蛋白升高的现象，若A/G<1.0，称为A/G比值倒置，常见于多发性骨髓瘤和聚球蛋白升高。4.先天性清蛋白缺乏症：有文献报道，因清蛋白合成障碍，血清中几乎没有清蛋白而导致清蛋白缺乏。9