血清总蛋白及白蛋白测定.ppt

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1、血清总蛋白及白/球比值的测定实验目的：1.混合物中某种物质浓度的测定方法2.熟悉血清总蛋白和白蛋白的测定方法3.掌握血清总蛋白和白/球比值的临床意义4.熟悉721分光光度计的使用生物化学实验基本技能训练一、血清总蛋白的测定（双缩脲法）二、血清白蛋白的测定（溴甲酚绿法）血清总蛋白的测定双缩脲（）在碱性溶液中与铜离子作用生成稳定的紫红色配合物，蛋白质与双缩脲相似，分子中的肽键（—CO—NH—）也能与双缩脲试剂形成紫色的配合物。这种配合物在540nm出有最大吸收峰。吸收度在一定范围内与蛋白质的含量成正比。（凡分子内含有两个或两个以上甲酰基氨基（—CONH—），不

2、论是直接相连还是通过一个或原子间接相连，都可发生双缩脲反应）双缩脲反应示意图实验操作：取三支试管按下表加入式样，混匀37摄氏度水浴放置十分钟，以空白管调零，540nm波长测定吸光度血清总蛋白的测定项目测定管标准管空白管血清/ml1.00－－蛋白质标准液/ml－1.00－理生盐水/ml－－1.00双缩脲试剂/ml5.005.005.00实验试剂（1）生理盐水（2）双缩脲试剂（3）蛋白质标准液（4）待测血清血清白蛋白的测定在pH=4.2环境中，带正电荷的白蛋白（pI=4.9）可以与阴离子染料溴甲酚绿（BCG）结合，溶液由黄变蓝。且颜色的深浅与白蛋白的浓度成正比

3、，此方法可以在不分离白蛋白的情况下直接测定血清白蛋白的含量。试剂中加入的非离子表面活性剂，可以提高蛋白质与染料的结合力和溶解度，在一定浓度下提高成色的稳定性。实验操作1.蛋白质标准曲线的绘制标准蛋白质溶液的稀释编号1234蛋白质标准液/ml0.100.200.400.60生理盐水/ml0.900.800.600.40稀释后蛋白质含量/(mg/ml)1.002.004.006.00血清白蛋白标准曲线的制作编号01234生理盐水/ml0.20--------上述1～4管标准稀释液/ml--0.200.200.200.20BCG应用液/ml5.005.005.0

4、05.005.002.血清白蛋白的测定用生理盐水按1：10的比例稀释血清，取稀释后的溶液0.02ml，加入BCG应用液5.0ml，混匀后立即比色，读取吸光度，并从标准曲线上查出相应的白蛋白浓度。3.白蛋白与球蛋白的含量比用双缩脲法测定血清标本中的总蛋白浓度，用总蛋白浓度减去白蛋白浓度即可得球蛋白的浓度，继而得出白球蛋白比。计算公式血清总蛋白含量(g/L)=A总/A标×C标血清白蛋白含量(g/L)=A白/A标×C标白/球比值=白蛋白含量/(总蛋白含量-白蛋白含量)参考值总蛋白60~80g/L白蛋白35～50g/L白/球比值1.5~2.5临床意义血清总蛋白生理

5、性波动。直立体位由于体液分布原因，血液相对浓缩，而长久卧床者血液较直立体位稀。因此长久卧床者血清总蛋白比直立活动时约低3～5g／L.新生儿血清总蛋白可比成人低5～8g／L.60岁以上的老年人约比成人低2g／L.长期营养不良、肝脏疾病，慢性肾炎等时，总蛋白含量降低；大量失水(如呕吐、腹泄等)时则升高。肝脏疾病、慢性肾炎以及慢性传染病有大量抗体生成时，白/球比值变小，甚至倒置。血清总蛋白增高：（1）血液浓缩，导致总蛋白浓度相对增高：严重腹泻、呕吐、高热时急剧失水，血清总蛋白浓度可明显升高。休克时，由于毛细血管通透性增加，血液中水分渗出血管。血液可发生浓缩，慢性

6、肾上腺皮质功能减退的患者，由于丢失钠的同时伴随水的丢失，血浆也可出现浓缩现象。（2）血浆蛋白质合成增加：主要见于球蛋白合成增加，多发性骨髓瘤患者。血清总蛋白降低：（1）血液稀释，导致总蛋白浓度相对降低：如静脉注射过多低渗溶液或因各种原因引起的钠、水潴留。（2）摄人不足和消耗增加：食物中长期缺乏蛋白质或慢性胃肠道疾病所引起的消化吸收不良，因患消耗性疾病，如严重结核病，甲状腺功能亢进，恶性肿瘤等，均可造成血清蛋白浓度降低。（3）蛋白质丢失：严重烧伤时大量血浆渗出，大量失血，肾病综合征时大量蛋白尿，溃疡性结肠炎时肠道长期丢失一定量的蛋白质，这些病理改变均可使血清

7、总蛋白浓度降低。白蛋白增高：主要由于血液浓缩而致相对性增高，如严重脱水和休克、严重烧伤、急性出血、慢性肾上腺皮质功能减低症。白蛋白减低：见于肝硬变合并腹水及其他肝功能严重损害（如急性肝坏死、中毒性肝炎等）营养不良、慢性消耗性疾病、糖尿病、严重出血肾病综合征等。当降低至25g/L以下易产生腹水。血清球蛋白是机体免疫器官制造的，球蛋白正常值为20-40g/L。球蛋白大部分在肝细胞外生成，与人体的免疫力有关系。球蛋白要保持一定的量，球蛋白检测值超过正常值说明体内存在免疫系统的亢进，球蛋白检测值低于正常值说明免疫力不足。当体内存在病毒等抗原时，机体的免疫器官就要增

8、兵，来消灭入侵者。因此，球蛋白产生增加。慢性肝炎和肝硬化患者的白蛋