放疗联合CpG-ODN及PD-1抑制剂对小鼠lewis肺癌的抑制作用

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1、分类号：R734.2单位代码：10159密级：公开学号：201520296硕士学位论文中文题目：放疗联合CpG-ODN及PD-1抑制剂对小鼠lewis肺癌的抑制作用英文题目：AntitumoreffectofradiotherapycombinedwithCpG-ODNandPD-1blockadeininmurinetumormodels论文作者：庄源指导教师：李光教授学科专业：肿瘤学完成时间：2018年2月中国医科大学硕士学位论文放疗联合CpG-ODN及PD-1抑制剂对小鼠lewis肺癌的抑制作用Antitumoreffectofradioth

2、erapycombinedwithCpG-ODNandPD-1blockadeininmurinetumormodels论文作者庄源指导教师李光申请学位医学硕士培养单位第一临床学院一级学科临床医学二级学科肿瘤学研究方向肺癌的放射治疗论文起止时间2017年1月—2018年2月论文完成时间2018年2月中国医科大学（辽宁）2018年2月I中国医科大学硕士学位论文摘要实验目的：1、建立C57/BL小鼠的lewis肺癌模型2、观察RT联合PD-1抑制剂联合CpG-ODN的三联疗法的抗肿瘤效果。3、对三联疗法抗肿瘤作用的机制进行初步探索。实验方法：建立荷瘤小

3、鼠模型，右后肢皮下种植作为primary肿瘤，左背部皮下种植作为secondary肿瘤。待右后肢瘤体长到直径为5mm左右时，对荷瘤小鼠进行随机分组，分为6组（A.B.C.D.E.F）A组:空白对照Control。B组：单纯放疗RT。C组：RT联合PD-1blockade。D组：RT联合CpG-ODN。E组：PD-1blockade联合CpG-ODN。F组：三联疗法组。隔天使用电子游标卡尺对肿瘤大小进行测量为观察。部分小鼠用于生存时间的观察，观察到第80天。部分小鼠于第24日处死以收获脾脏和完整肿瘤组织，采用研磨法获得单细胞悬液，采用酶消化法提取肿瘤

4、浸润淋巴细胞(TIL)，流式细胞术检测脾脏和TIL中的CD8+T/CD4+T细胞淋巴细胞的频率以及表型，检测CD8+T细胞分泌的IFN-γ和TNF-α，从而分析CD8+T淋巴细胞功能。同时，还检测了肿瘤浸润树突细胞的成熟和活化。此外，检测了脾脏和TIL中CD4+Foxp3+Treg细胞的频率。为直观观察三联疗法的作用效果与CD8+T细胞与CD4+T细胞的关系。另设G组：三联疗法+CD8+Tcell抑制抗体组，H组：三联疗法+CD4+Tcell抑制抗体组。对三联疗法组出现“完全肿瘤消退”的荷瘤小鼠采取大剂量肿瘤细胞冲击眼验证荷瘤小鼠的免疫记忆型。实验

5、结果：三联疗法组的荷瘤小鼠出现了明显的肿瘤生长抑制，甚至出现“完全的肿瘤消退”，且这种抗肿瘤作用具有系统性，并明显延长了小鼠的生存时间。在联合治疗组可以观察到CD8+Tcell比例的明显增高，增高的表型主要为效应记忆型，而在CD8+Tcell删除组，联合治疗的效果则明显降低。进一步分析发现不仅CD8+Tcell的比例明显增加，其活化和对肿瘤的杀伤能力也大幅度提高，表现为分泌的IFN-γ和TNF-α增多。我们还在三联疗法组检测到肿瘤浸润树突细胞的活化增强。此外，联合治疗还使得具有负性调节作用的调节性T细胞的比例下降，进一步加强了机体的抗肿瘤效果。联合

6、治疗还具有有效的免疫记忆性，在冲击接种后，略见瘤体出现，随即肿瘤消退。不仅如此，三联疗法对荷瘤小鼠的血象影响和其肺毒性甚微。实验结论：三联疗法能有效抑制肿瘤的生长，明显延长了小鼠的生存时间，增强了CD8+T细胞的的频率和功能，加强了肿瘤浸润树突细胞的成熟活化，并且能减III中国医科大学硕士学位论文弱肿瘤局部Treg细胞免疫抑制功能。此外。在有效的抗肿瘤作用的基础上，其安全性也得到了肯定，使得这种新型治疗策略更具有临床意义和价值。关键词：肺癌；放射治疗；PD-1；CpGIV中国医科大学硕士学位论文AbstractObjective:1.Toestab

7、lishalewislungcancermodelinC57/BLmice.2.ToobservetheantitumoreffectoftripletherapywithRTcombinedwithPD-1inhibitorandCpG-ODN.3.Toexploretheanti-tumormechanismofthistripletherapy.Method:Atumor-bearingmousemodelwasestablished,therighthindlimbwassubcutaneouslyimplantedasaprimarytu

8、mor,andtheleftbackwassubcutaneouslyimplantedasasecondarytumor